氧化低密度脂蛋白在人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞對(duì)腎素(前體)受體表達(dá)的影響.pdf

1、動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)是冠狀動(dòng)脈疾病、腦卒中和周圍動(dòng)脈疾病等血管性疾病的病理基礎(chǔ)，其特征是脂質(zhì)和纖維成分在動(dòng)脈壁的不斷積累，而且在慢性炎癥性條件下，可以引發(fā)斑塊破裂和血栓形成的急性臨床事件。對(duì)其發(fā)病機(jī)制的研究已經(jīng)持續(xù)了數(shù)十年，內(nèi)皮功能障礙是動(dòng)脈粥樣硬化的始動(dòng)因素，平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移是動(dòng)脈粥樣硬化病理過(guò)程中的重要特征。氧化修飾低密度脂蛋白(ox-LDL)是動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生、發(fā)展乃至不穩(wěn)定斑塊形成的關(guān)鍵因子

2、，在動(dòng)脈粥樣硬化中的病理作用已得到公認(rèn)。ox-LDL作為AS的最重要危險(xiǎn)因素之一，主要通過(guò)損傷內(nèi)皮細(xì)胞、參與泡沫細(xì)胞的形成、調(diào)控平滑肌細(xì)胞的增殖和引起血小板粘附、聚集等多個(gè)方面參與AS的發(fā)生發(fā)展。
　　 高血壓作為另一個(gè)重要危險(xiǎn)因素，是一個(gè)多層面的與心、腦、腎血管異常和功能障礙相關(guān)的疾病。腎素血管緊張素系統(tǒng)(reninangiotensinsystem，RAS)在血管炎癥和高血壓的發(fā)展中起著關(guān)鍵性作用。腎素（前體）受體[(pro

3、)reninreceptor,(P)RR]作為RAS的新成員之一，近幾年在心血管疾病和腎臟疾病中的重要性受到廣泛的關(guān)注。該受體與腎素和腎素前體結(jié)合后，可以通過(guò)不依賴于傳統(tǒng)的AngⅡ途徑，激活細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，上調(diào)促纖維化基因的表達(dá)，最終引起血壓升高，心肌纖維化和腎小球硬化等靶器官損害。
　　 我們課題組前期實(shí)驗(yàn)證實(shí)(P)RR存在于人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)中，且可以通過(guò)引起內(nèi)皮細(xì)胞功能紊亂、炎癥因子表達(dá)等機(jī)制參與動(dòng)脈粥樣

4、硬化的發(fā)生和發(fā)展。既往有研究證實(shí)在血管平滑肌細(xì)胞中亦存在(P)RR的表達(dá)，以腎素或腎素前體刺激后，可使ERK1/2磷酸化增強(qiáng)，平滑肌細(xì)胞過(guò)度增殖，與動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)。而ox-LDL刺激誘導(dǎo)的平滑肌細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化、異常增殖和遷移至內(nèi)膜下，在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展中起重要作用，那么ox-LDL在血管平滑肌細(xì)胞中對(duì)(P)RR的表達(dá)是否存在影響，進(jìn)而參與動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展呢？目前尚無(wú)報(bào)道。
　　 目的:
　　 研究體外培養(yǎng)的

5、人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(humanaorticsmoothmusclecells，HASMCs)中是否存在(P)RR表達(dá)及ox-LDL刺激后對(duì)(P)RRmRNA及蛋白表達(dá)的影響。
　　 方法:
　　 1.體外培養(yǎng)HASMCs。
　　 2.應(yīng)用免疫熒光技術(shù)(Immunofluorescencetechnique)檢測(cè)HASMCs中是否存在(P)RR的表達(dá)。
　　 3.以100μg/mlox-LDL作為干預(yù)終濃度

6、，作用于HASMCs不同的時(shí)間，分別設(shè)培養(yǎng)1，2，4，6，12和24小時(shí)亞組，正常對(duì)照組用完全培養(yǎng)基培養(yǎng)24小時(shí)，用Real-timePCR和westernblot方法檢測(cè)，確定ox-LDL的刺激時(shí)間點(diǎn)并觀察ox-LDL作用不同時(shí)間對(duì)(P)RRmRNA和蛋白表達(dá)的影響。
　　 4.根據(jù)時(shí)間組結(jié)果，篩選ox-LDL刺激(P)RR表達(dá)最強(qiáng)的時(shí)間點(diǎn)，用不同濃度ox-LDL作用于HASMCs，分別設(shè)25，50，100，150，200，3

7、00μg/ml不同亞組，每亞組分別干預(yù)6小時(shí)，同樣用Real-timePCR和westernblot方法檢測(cè)，觀察不同濃度ox-LDL對(duì)(P)RR的mRNA和蛋白表達(dá)的影響。
　　 結(jié)果:
　　 1.HASMCs中存在(P)RR的表達(dá)。
　　 2.100μg/mlox-LDL刺激HASMCs，可上調(diào)(P)RRmRNA和蛋白的表達(dá)，在孵育2小時(shí)后(P)RR表達(dá)開始升高，6小時(shí)達(dá)到高峰，隨后逐漸下降但仍高于對(duì)照組。<

8、br>　　 3.不同濃度ox-LDL刺激HASMCs，與對(duì)照組相比，50μg/ml組ox-LDL作用6小時(shí)后，可顯著增加(P)RRmRNA和蛋白的表達(dá)并且達(dá)到峰值，100，150，200，300μg/ml組表達(dá)較50μg/ml組無(wú)進(jìn)一步升高趨勢(shì)。
　　 結(jié)論:
　　 1.HASMCs中存在(P)RR的表達(dá)。
　　 2.ox-LDL刺激HASMCs不同時(shí)間可使(P)RRmRNA和蛋白表達(dá)增多，并且具有一定的時(shí)間依