SPT對(duì)離體大鼠胸主動(dòng)脈環(huán)和血管平滑肌細(xì)胞電流的影響.pdf

1、目的：螺內(nèi)酯（spironolactone，SPT）又名安體舒通，已被用來(lái)作為一個(gè)保鉀利尿劑超過(guò)30年，它是一種人工合成的17-內(nèi)酯的類(lèi)固醇的ALD拮抗劑。在臨床上它本身的降壓作用比較弱，但其抗高血壓的作用已經(jīng)被充分肯定；SPT也已被證明可以減少心臟衰竭（HF）患者的死亡率，改善HF患者的心房傳導(dǎo)和重塑，對(duì)心血管系統(tǒng)有很好的保護(hù)作用。但其在離體血管平滑肌的研究未見(jiàn)報(bào)道。也有研究報(bào)道SPT對(duì)成纖維細(xì)胞的Kv通道有影響，同時(shí)觀察到SPT類(lèi)似

2、于鈣阻滯劑的方式作用于緩慢的鈣通道。但是關(guān)于SPT對(duì)主動(dòng)脈血管平滑肌的鉀電流和鈣電流有何影響未見(jiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)分別從離體器官和細(xì)胞水平來(lái)研究SPT舒張血管的作用機(jī)制。
　　方法：離體血管平滑肌張力記錄法：首先用脫臼法處死大鼠，打開(kāi)胸腔迅速分離胸主動(dòng)脈，將取下來(lái)的大鼠胸主動(dòng)脈放入事先準(zhǔn)備好的4℃生理鹽溶液中，修剪主動(dòng)脈周?chē)M織，并將其剪成2-3mm的血管環(huán)。血管環(huán)管腔用不銹鋼掛鉤穿過(guò)，使血管環(huán)水平懸掛在10ml的PSS液浴管中，用一根

3、細(xì)的鋼絲與張力換能器相連，使用Powerlab生物信號(hào)測(cè)定系統(tǒng)來(lái)記錄血管環(huán)的張力變化情況。浴槽中供氧（95％氧氣與5%二氧化碳的混合而成），前負(fù)荷2g，在37℃的PSS液中每隔20分鐘換液1次，平衡1小時(shí)后，應(yīng)用SPT，觀測(cè)其對(duì)SpragueDawley（SD）大鼠對(duì)離體胸主動(dòng)脈環(huán)的作用及不同工具藥的影響。膜片鉗全細(xì)胞記錄法：脫臼法處死大鼠后，立刻取出胸主動(dòng)脈，鈍性分離，分離出含有血管平滑肌細(xì)胞的懸液，選擇邊緣清晰的細(xì)胞來(lái)進(jìn)行膜片鉗實(shí)驗(yàn)

4、，記錄細(xì)胞膜電流，研究螺內(nèi)酯（SPT）對(duì)正常大鼠胸主動(dòng)脈血管平滑肌鉀電流和鈣電流的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果的數(shù)據(jù)除了特殊標(biāo)明外均用sx±來(lái)表示，所得到的數(shù)據(jù)利用SPSS11.0的統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。
　　結(jié)果：（1）SPT（1×10-5~2×10-4mol·L-1）對(duì)靜息狀態(tài)下的離體胸主動(dòng)脈血管環(huán)無(wú)顯著作用。（2）SPT（1×10-5~2×10-4mol·L-1）對(duì)KCl（30mmol·L-1）或NE（1×10-6mol·L-1）

5、誘發(fā)的血管環(huán)的收縮有濃度依賴(lài)性的舒張作用，與溶劑對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。（3）SPT（1×10-5~2×10-4mol·L-1）對(duì)KCl（30mmol·L-1）或NE（1×10-6mol·L-1）誘發(fā)去內(nèi)皮血管的收縮也能產(chǎn)生濃度依賴(lài)性的舒張作用，與內(nèi)皮完整組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。（4）在KCl（30mmol·L-1）預(yù)收縮血管環(huán)的基礎(chǔ)上，加入Na+/H+交換阻滯劑氨氯吡咪（AM,amiloride,1μm

6、ol·L-1)，對(duì)SPT（1×10-5~2×10-4mol·L-1）引起的離體動(dòng)脈血管環(huán)的舒張有明顯的抑制作用，與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。（5）在KCl（30mmol·L-1）預(yù)收縮血管環(huán)的基礎(chǔ)上，加入鉀通道阻斷劑氯化鋇(BaCl2,2μmol·L-1)、四乙胺(TEA,0.2mol·L-1)、四氨基吡啶(4-AP,1mmol·L-1)對(duì)SPT的舒張血管的作用無(wú)明顯抑制，與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

7、而ATP敏感鉀通道（KATP）格列苯脲(Gli,10μmol·L-1)能明顯抑制SPT對(duì)離體動(dòng)脈血管的舒張作用，與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。（6）在無(wú)鈣的生理鹽溶液中，用2×10-4mol·L-1的SPT預(yù)孵20分鐘后，加入1μmol·L-1的NE，發(fā)現(xiàn)血管出現(xiàn)了短暫的收縮，待其平穩(wěn)后，再加入2.5mmol·L-1的CaCl2，發(fā)現(xiàn)血管繼續(xù)收縮。對(duì)照組用溶劑預(yù)孵。結(jié)果顯示，在無(wú)鈣的PSS溶液中，SPT對(duì)NE收縮血管無(wú)明

8、顯抑制作用，與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；SPT對(duì)CaCl2收縮血管有顯著抑制作用，與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。（7）SPT（2×10-4mol·L-1）對(duì)胸主動(dòng)脈VSMC的鉀電流無(wú)明顯影響，與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）（8）SPT（2×10-4mol·L-1）對(duì)胸主動(dòng)脈VSMC的鈣電流有明顯的抑制作用，與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。
　　結(jié)論1、SPT對(duì)靜息狀態(tài)下

9、的離體大鼠胸主動(dòng)脈環(huán)無(wú)作用。2、SPT對(duì)KCl（30mmol·L-1）或NE（1×10-6mol·L-1）預(yù)收縮的內(nèi)皮完整和去內(nèi)皮的大鼠離體胸主動(dòng)脈血管環(huán)都有濃度依賴(lài)性的舒張作用。3、SPT對(duì)離體胸主動(dòng)脈血管環(huán)的舒張作用與Na+/H+交換有關(guān)。4、SPT對(duì)離體胸主動(dòng)脈環(huán)的舒張作用與KiR通道、KCa通道和KV通道無(wú)關(guān)，與KATP通道有關(guān)。5、SPT可通過(guò)抑制外鈣內(nèi)流來(lái)舒張血管。6、SPT（2×10-4mol·L-1）對(duì)胸主動(dòng)脈VSMC的