酵母細(xì)胞谷胱甘肽的抽提及分離純化研究.pdf

1、谷胱甘肽(GSH)是一種具有特殊活性基團(tuán)（巰基和γ-谷氨?；┑娜模浣Y(jié)構(gòu)由谷氨酸、半胱氨酸及甘氨酸組成。谷胱甘肽分子中的巰基能與體內(nèi)的各種自由基結(jié)合，維持生物體內(nèi)適宜的氧化環(huán)境。谷胱甘肽能與鉛、汞等重金屬鹽絡(luò)合，具有解毒作用。此外，谷胱甘肽具有增強(qiáng)免疫力、延緩衰老、抗輻射等輔助醫(yī)療功能，廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥和化妝品等領(lǐng)域，具有重要的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值和產(chǎn)業(yè)前景。本文對(duì)酵母細(xì)胞中的谷胱甘肽進(jìn)行了分離純化研究，主要結(jié)果如下:
　　 1

2、.通過單因素實(shí)驗(yàn)，考察碳源和氮源的種類以及濃度、有機(jī)和無機(jī)氮源的混合比例、前體半胱氨酸、表面活性劑吐溫80對(duì)培養(yǎng)菌體的生物量以及細(xì)胞內(nèi)GSH含量的影響。采用正交實(shí)驗(yàn)確定了合成谷胱甘肽酵母培養(yǎng)基的優(yōu)化組合:葡萄糖40 g/L，酵母粉12g/L，硫酸銨5g/L，磷酸鉀2g/L，七水硫酸鎂0.5 g/L，肌醇0.1 g/L;發(fā)酵至6小時(shí)添加4mmol/L的L半胱氨酸和0.1 g/L的吐溫80，在此條件下生長酵母細(xì)胞的內(nèi)GSH含量達(dá)到1.97

3、mg/g，較初始條件下1.62 mg/g提高了21％。
　　 2.對(duì)酵母細(xì)胞內(nèi)GSH分別采用乙醇、SDS、鹽酸、沸水浴、微波、氯化鈉六種抽提方法進(jìn)行抽提效果比較，且選擇單因素實(shí)驗(yàn)方法考察了乙醇抽提法中的乙醇濃度、抽提溫度、時(shí)間、乙醇用量等因素對(duì)GSH抽提得率的影響，3因素4水平正交試驗(yàn)結(jié)果表明，乙醇抽提法谷胱甘肽分離效果好。在每克濕菌體中添加50％乙醇7mL，40℃處理7min，抽提GSH達(dá)到2.21mg，較沸水浴抽提1.21m

4、g提高了82.64％。
　　 3.采用001×7、D001、D301三種吸附樹脂對(duì)酵母抽提液中的谷胱甘肽進(jìn)行分離，分別考察了洗脫液（氨水、氨性乙醇、鹽酸及氯化鈉）濃度，離子交換柱(Φ2.5 cm×30 cm)裝柱高度，上樣流速和洗脫流速對(duì)谷胱甘肽吸附和洗脫效果的影響。結(jié)果表明，D301樹脂對(duì)谷胱甘肽的吸附分離效果最好，吸附率達(dá)到84.63％;60％乙醇+10％氨水作為洗脫劑的洗脫效果較好，達(dá)85.51％; D301樹脂裝柱高度為

5、20cm，上樣流速和洗脫流速分別為1 ml/min和2 ml/min，谷胱甘肽分離得率達(dá)到62.3％。
　　 4.采用高效液相色譜對(duì)經(jīng)交換樹脂D301吸附分離的GSH抽提液進(jìn)行分析;通過真空濃縮GSH純化液，考察損失率和濃縮倍率，對(duì)影響濃縮的溫度、時(shí)間兩個(gè)因素進(jìn)行優(yōu)化，確定最優(yōu)的真空濃縮條件。結(jié)果表明，經(jīng)D301樹脂吸附分離純化的濃縮液中雜峰明顯減少，GSH純度明顯提高，達(dá)到68.3％;在真空度0.095 Mpa，溫度55℃，時(shí)