重組巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)生產(chǎn)還原型谷胱甘肽條件及其分離純化的研究.pdf

1、γ-L-谷氨酰-L-半胱氨酰甘氨酸(γ-L-cysteinglycine，glutathione，簡稱GSH)是重要的三肽化合物，其主要工業(yè)生產(chǎn)途徑是通過微生物發(fā)酵進而提取，并被廣泛用于臨床疾病的治療和其他方面。國內(nèi)外關(guān)于GSH的生產(chǎn)及其應用已經(jīng)有了一定的研究，但其工業(yè)化生產(chǎn)技術(shù)一直被國外極少數(shù)發(fā)達國家壟斷著，國內(nèi)自發(fā)研制的GSH產(chǎn)量和純度都相對較低，還尚未實現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)，從而造成GSH的市場價格居高不下，影響了GSH的推廣和應用。本文

2、通過大量的試驗研究，采取以下途徑實現(xiàn)了GSH的高產(chǎn)和高純度，為實現(xiàn)GSH的國內(nèi)工業(yè)化生產(chǎn)提供理論參考。 首先，本文通過研究酵母細胞中含硫物質(zhì)的代謝過程，改造了其代謝途徑。確定了適宜的培養(yǎng)基：20g/L甘油，10g/L酵母膏，20g/L蛋白胨，0.05mol/L磷酸鹽緩沖液，13.4g/LYNB，4×10-4g/L生物素，0.05mol/LL-cys；確定了客觀培養(yǎng)條件：溫度為28℃-30℃、溶氧充分、初始pH為6.0；在此基礎上

3、，經(jīng)過5天的發(fā)酵，GSH產(chǎn)量可達到6.0g/L，實現(xiàn)了GSH的高產(chǎn)量。 然后，根據(jù)GSH主要分布在微生物細胞胞內(nèi)，并可通過溫度或有機物改變細胞膜的通透性或破壞細胞壁將其釋放出來的特點，并利用GSH等電點在5.93左右，使其在酸性條件下帶正電荷，這樣GSH將與陽離子樹脂進行離子交換而被樹脂吸附，從而將GSH與其他雜質(zhì)分離。此外，為了獲得更精制的產(chǎn)品，本實驗還把超濾、納濾等技術(shù)引入到分離純化工藝中，使GSH的收率達到了90％，純度也