應(yīng)用紅外光譜法區(qū)分常見(jiàn)食源性致病菌的研究.pdf

1、食源性致病菌可以經(jīng)過(guò)肉類(lèi)、蔬菜、水產(chǎn)品、乳制品等引起細(xì)菌性食品中毒，是危害人類(lèi)健康、威脅公共安全的重要病原體。因此及時(shí)發(fā)現(xiàn)食品中的污染病原菌十分重要，如今，食源性致病菌的檢測(cè)與鑒定已經(jīng)成為食品衛(wèi)生行業(yè)不可或缺的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。
　　 有關(guān)食源性致病菌的檢測(cè)方法有很多，傳統(tǒng)的檢測(cè)鑒定方法是根據(jù)菌落的形態(tài)及其生理生化反應(yīng)來(lái)判斷的，但是該方法通常耗時(shí)耗力，涉及的實(shí)驗(yàn)較多，需要比較繁瑣的過(guò)程和復(fù)雜的操作，而且對(duì)于一些表觀特征相似的病原菌難以實(shí)

2、現(xiàn)準(zhǔn)確識(shí)別。利用分子生物學(xué)、免疫學(xué)和遺傳學(xué)方法鑒別微生物的技術(shù)雖然具有較高的特異性、敏感性和準(zhǔn)確性，但是此類(lèi)技術(shù)操作復(fù)雜，需要專(zhuān)業(yè)人員，而且儀器和試劑費(fèi)用較高，難以在常規(guī)實(shí)驗(yàn)室中實(shí)現(xiàn)廣泛應(yīng)用。
　　 本研究主要是采集了不同的食源性致病菌菌體細(xì)胞以及培養(yǎng)液上清的紅外光譜，通過(guò)對(duì)譜圖進(jìn)行處理、比較，提取譜圖信息運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法和化學(xué)計(jì)量學(xué)的方法對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理分析，以期建立一種快速檢測(cè)食源性致病菌的新型方法。
　　 本研究論文主

3、要結(jié)果如下：
　　 1、大腸桿菌O157：H7、腸炎沙門(mén)氏菌、單核增生性李斯特菌、金黃色葡萄球菌四株菌菌體細(xì)胞400-4000cm-1范圍內(nèi)紅外光譜的吸收峰主要由菌體細(xì)胞中蛋白質(zhì)、脂類(lèi)、糖類(lèi)、核酸等大分子中的-OH、-CH3、CH2、C=O、N-H、C-N、C=O、P-O的伸縮、彎曲和環(huán)振動(dòng)而產(chǎn)生。
　　 2、確定大腸桿菌O157：H7、腸炎沙門(mén)氏菌、單核增生性李斯特菌、金黃色葡萄球菌四株菌菌體細(xì)胞的光譜指紋區(qū)為1500

4、-800cm-1。
　　 3、對(duì)四株菌食源性致病菌光譜指紋區(qū)(1500-800cm-1)進(jìn)行一階導(dǎo)數(shù)運(yùn)算，提取數(shù)據(jù)進(jìn)行皮爾森相關(guān)系數(shù)分析、主成分分析和聚類(lèi)分析，三種分析方法都可以將這四株菌進(jìn)行很好的區(qū)分。
　　 4、四株食源性致病菌分別在30℃、37℃兩種不同的培養(yǎng)溫度和BHI、LB、NB、TSB四種不同的培養(yǎng)基培養(yǎng)條件下，平行光譜指紋區(qū)重復(fù)性好。而且不同的培養(yǎng)條件沒(méi)有對(duì)細(xì)胞的化學(xué)結(jié)構(gòu)產(chǎn)生顯著影響，紅外光譜指紋區(qū)穩(wěn)定。<

5、br>　　 5、應(yīng)用紅外光譜法在不同培養(yǎng)條件下四株食源性致病菌的區(qū)分效果不同，但是沒(méi)有呈現(xiàn)出規(guī)律性。革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌在紅外光譜圖上表現(xiàn)出了明顯的不同，紅外光譜在區(qū)分不同的革蘭氏陰性菌(大腸桿菌O157：H7、腸炎沙門(mén)氏菌)的能力要弱于區(qū)分不同的革蘭氏陽(yáng)性菌(單核增生性李斯特菌、金黃色葡萄球菌)。
　　 6、為了進(jìn)一步研究紅外光譜指紋技術(shù)應(yīng)用于食源性致病菌檢測(cè)的范圍，采集10株單增李斯特菌菌體細(xì)胞的紅外光譜，選取150

6、0-800cm-1光譜一階導(dǎo)數(shù)數(shù)據(jù)，計(jì)算它們之間的光譜距離D值和進(jìn)行聚類(lèi)分析，結(jié)果表明應(yīng)用紅外光譜技術(shù)在一定程度上可以表現(xiàn)出菌株的血清分型特征，在血清型水平上相近的菌株，其指區(qū)的紅外光譜相似程度更高。
　　 7、應(yīng)用光譜技術(shù)鑒定檢測(cè)食源性致病菌，為了達(dá)到簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)步驟、降低試驗(yàn)成本、減少實(shí)驗(yàn)時(shí)間的目的。本論文創(chuàng)新性的使用細(xì)菌培養(yǎng)液上清作為研究對(duì)象、應(yīng)用主成分分析方法區(qū)分不同分類(lèi)水平的病原菌。結(jié)果表明該方法可以區(qū)分大腸桿菌O157：