菜籽多糖的提取、純化及對(duì)腸道益生菌的增殖作用研究.pdf

1、本文研究了菜籽多糖對(duì)小鼠腸道內(nèi)益生菌的增殖作用的影響。首先,通過(guò)堿液提取粗多糖,超濾膜去除蛋白,獲得菜籽粗多糖后,將該多糖依次通過(guò)DEAE-纖維素和Sephadex G-100柱分離純化得到兩個(gè)多糖組分(RP1和RP2);然后,通過(guò)灌胃小鼠菜籽多糖,研究了該多糖對(duì)小鼠體內(nèi)腸道菌群的影響;最后,以菜籽多糖為主要原料,開(kāi)發(fā)一種具有保健作用的菜籽多糖益生元含片。主要研究?jī)?nèi)容及結(jié)果如下:
　　菜籽多糖的提取純化及純度鑒定。首先,將菜籽經(jīng)過(guò)

2、粉碎、去皮后,用石油醚脫脂、95％乙醇去除單糖、低聚糖和部分色素等,收集菜籽粕放入25倍體積,4.1%NaOH溶液中,在86℃條件下提取3 h;然后,將上述浸提液先后用50 kDa超濾膜和3 kDa超濾膜過(guò)濾并收集濾液,冷凍干燥后獲得菜籽粗多糖;最后,將該粗多糖通過(guò)DEAE-纖維素柱層析純化,依次用蒸餾水和0.10 mol/L NaCl溶液洗脫,收集洗脫的組分,經(jīng)過(guò)透析、濃縮和冷凍干燥后,再用Sephadex G-100層析柱進(jìn)一步分離

3、純化,獲得兩個(gè)多糖組分(RP1和RP2)并進(jìn)行純度鑒定。結(jié)果表明:Molisch反應(yīng)呈陽(yáng)性,說(shuō)明 RP1和RP2都是糖;苯酚-硫酸法法檢測(cè)RP1及RP2的總糖含量分別為70.1及68.5%;碘-碘化鉀反應(yīng)呈陰性,說(shuō)明 RP1和RP2都不含淀粉;考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定RP1和RP2中蛋白質(zhì)含量分別為12.6和17.8%;高效液相色譜圖中 RP1和RP2都呈現(xiàn)單一對(duì)稱(chēng)的峰,說(shuō)明兩者都是單一的組分,計(jì)算得RP1及RP2的分子量分別為44.36及28

4、.87 kDa。
　　菜籽多糖對(duì)小鼠體內(nèi)腸道菌群的調(diào)節(jié)作用。購(gòu)入SPF級(jí)雌性昆明種小白鼠130只,適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后,將小鼠隨機(jī)分為13組,每組10只,即空白組(灌生理鹽水),低聚果糖對(duì)照組(低、中、高劑量),粗多糖組(低、中、高劑量),RP1組(低、中、高劑量)和R P2組(低、中、高劑量)。在試驗(yàn)前、試驗(yàn)第15和30天,隨機(jī)抽取3只老鼠頸椎脫臼處死,并無(wú)菌采集腸道內(nèi)容物,分別測(cè)量?jī)?nèi)容物的pH、揮發(fā)性鹽基態(tài)氮和腸道內(nèi)五種菌(雙歧桿

5、菌、乳酸菌、大腸桿菌、腸球菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌)的數(shù)量變化,并計(jì)算小鼠腸道B/E值和益生元指數(shù)PI的變化。結(jié)果表明:低聚果糖、粗多糖、RP1和RP2都可以降低小鼠腸道 pH和揮發(fā)性鹽基態(tài)氮,對(duì)雙歧桿菌和乳酸菌有明顯的促進(jìn)作用,但對(duì)大腸桿菌、腸球菌和產(chǎn)氣莢膜梭菌則有明顯的抑制作用;它們對(duì)小鼠腸道菌增殖效果從大到小的排列順序?yàn)?低聚果糖>RP1>RP2>粗多糖;另外,高劑量組效果比中劑量組好,低劑量組效果最差,這說(shuō)明菜籽多糖可以調(diào)節(jié)腸道菌群平衡

6、,且在一定程度上呈現(xiàn)劑量與效果正相關(guān)關(guān)系。
　　菜籽多糖對(duì)小鼠腸道乙酸、丙酸及乳酸的含量變化的影響。取上述試驗(yàn)動(dòng)物的腸道內(nèi)容物,一部分用無(wú)菌蒸餾水稀釋10倍后,在10000 r/min條件下,離心10min,上清液經(jīng)0.45μm濾膜過(guò)濾后,采用高效液相色譜(HPLC)法分析樣品中的乙酸、丙酸及乳酸的含量。結(jié)果表明,灌胃低聚果糖、粗多糖、RP1和RP2都能促進(jìn)小鼠腸道內(nèi)乙酸、丙酸及乳酸含量的增加;低聚果糖效果最明顯,RP1其次,RP

7、2再次,粗多糖的效果最差;高劑量組效果比中劑量組好,低劑量組效果最差。
　　菜籽多糖益生元含片的工藝研究。以菜籽多糖為主要原料,低聚果糖、檸檬酸、橙汁、花青素、奶粉及淀粉等為輔料,開(kāi)發(fā)一種對(duì)人體有保健作用的益生元含片。首先,以感官評(píng)分為評(píng)價(jià)指標(biāo),通過(guò)單因素試驗(yàn),確定了菜籽多糖、低聚果糖、檸檬酸、花青素、淀粉及奶粉的添加量。在此基礎(chǔ)上,以感官評(píng)分為評(píng)價(jià)指標(biāo),淀粉、奶粉、低聚果糖和檸檬酸為因素,通過(guò)L9(34)正交試驗(yàn),優(yōu)化該含片的主