雙孢菇多糖提取和分離純化的研究.pdf

1、隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的迅速發(fā)展,人民生活水平的不斷提高,注重營(yíng)養(yǎng)保健成為現(xiàn)代人生活中的一個(gè)重要課題。中國(guó)的保健飲食習(xí)慣已經(jīng)有上千年歷史,尤其近幾年,保健食品逐漸成為消費(fèi)中的一大亮點(diǎn)。真菌多糖作為功能產(chǎn)品中的重要部分,也發(fā)揮著日益重要的作用。本課題主要研究了雙孢菇多糖的提取、分離純化和鑒定,具體內(nèi)容及實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:
　　(1)本實(shí)驗(yàn)以優(yōu)質(zhì)雙孢菇為原料,測(cè)定其水分含量為87.93％。雙孢菇多糖的紫外掃描圖譜顯示,最大吸收峰值在489nm處。采

2、用1％的檸檬酸護(hù)色,預(yù)處理后得到雙孢菇勻漿液。
　　(2)利用超聲波輔助復(fù)合酶法提取多糖,對(duì)超聲波進(jìn)行單因素實(shí)驗(yàn),確定其最佳工藝條件:提取時(shí)間控制在30min左右,最佳料液比為1:20,最適宜溫度為30℃,同時(shí)600W為最佳超聲波提取功率。通過(guò)單因素及L9(34)正交實(shí)驗(yàn),確定纖維素酶的最佳工藝條件為:加酶量1.2％,pH4.0,酶解溫度50℃,酶解時(shí)間100min;中性蛋白酶的最佳工藝為:加酶量1.0％,pH7.5,酶解溫度45

3、℃,酶解時(shí)間100min。
　　(3)實(shí)驗(yàn)以單因素實(shí)驗(yàn)為依據(jù),以脫色率和多糖損失率為指標(biāo)進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)。對(duì)活性炭的脫色溫度、時(shí)間、添加量及pH值進(jìn)行了研究,確定其最佳脫色條件為:添加量1.5％,最適宜的pH值為5.0,最佳溫度50℃,脫色時(shí)間60min。
　　(4)Sevag法利用有機(jī)溶劑能使蛋白質(zhì)變性沉淀的原理對(duì)其進(jìn)行分離,該法條件溫和,脫除效率高。將Sevag法脫蛋白后的糖液經(jīng)紫外全波長(zhǎng)掃描,圖譜顯示,在260nm和280

4、nm處都沒(méi)有顯示出吸收峰,說(shuō)明Sevag法脫蛋白的脫除效果較好,除蛋白效率高。
　　(5)通過(guò)對(duì)不同乙醇體積的醇沉與多糖得率關(guān)系的研究,當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)為75％時(shí),多糖得率較高,顏色較淺為淡黃褐色。因此多糖醇沉?xí)r,選取75％的乙醇體積分?jǐn)?shù)并置于4℃下進(jìn)行醇沉。
　　(6)雙孢菇多糖經(jīng)DEAE-纖維素52離子交換層析,其對(duì)糖液中各組分的吸附力不同,得到兩個(gè)目的峰:PR-Ⅰ和PR-Ⅱ,以及雜質(zhì)。兩種主峰物質(zhì)均易溶于水。PR-Ⅰ主要

5、是在剛一開始洗脫,0.02mol/L,pH=6.8的磷酸鹽緩沖液的洗脫條件下出現(xiàn)的;PR-Ⅱ是在0.2mol/L NaCl-磷酸鹽緩沖液濃度下洗脫出的。
　　(7)凝膠過(guò)濾法在生物大分子的分離和純化技術(shù)中是不可或缺的一類介質(zhì)。對(duì)離子交換得到的組分PR-Ⅰ和PR-Ⅱ進(jìn)行G-100凝膠過(guò)濾層析,均得到了單一對(duì)稱的完整峰形,說(shuō)明PR-Ⅰ和PR-Ⅱ?yàn)榫患?jí)分多糖,實(shí)驗(yàn)中分離出了純度較高的雙孢菇多糖。
　　(8)雙孢菇的多糖組分PR-