漆酶高產(chǎn)菌株選育及其降解秸稈木質(zhì)素機(jī)理研究.pdf

1、本試驗(yàn)選擇以擔(dān)子綱白腐真菌（Pleurotus ostreatus WY-01）為出發(fā)菌株，利用N+注入技術(shù)對其進(jìn)行誘變選育，獲得一株高產(chǎn)漆酶誘變菌株WY-02。運(yùn)用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)對其固體發(fā)酵培養(yǎng)基和發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化，采用紅外光譜法探討誘變菌株WY-02對油菜秸稈中木質(zhì)素的生物降解機(jī)制。
　　 對白腐真菌（Pleurotus ostreatus WY-01）進(jìn)行N+注入的結(jié)果表明：當(dāng)N+注入劑量為80×2.6×1014ions/c

2、㎡時，孢子存活率回升到26％，并且在該劑量下孢子正突變率達(dá)到最大，因此確定80×2.6×1014ions/c㎡為最佳N+注入劑量。經(jīng)過N+反復(fù)的注入誘變篩選，突變高產(chǎn)菌株WY-02的漆酶活力由出發(fā)菌（Pleurotus ostreatus WY-01）的最高峰值酶活4.17U/g提高到12.5U/g。突變菌株WY-02經(jīng)傳5代培養(yǎng)，產(chǎn)酶性能穩(wěn)定。
　　 采用單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)對突變菌株WY-02產(chǎn)漆酶的固體培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化，確定

3、突變菌株的最佳產(chǎn)酶培養(yǎng)基為：葡萄糖10g/L，酒石酸銨0.2 g/L，硫酸銅0.015g/L。優(yōu)化后培養(yǎng)基最適發(fā)酵條件：發(fā)酵溫度為28℃，培養(yǎng)基起始pH為4.5，接種量為每15g油菜秸稈粉3個菌塞（（）12mm），誘導(dǎo)劑用1mmol/L ABTS。經(jīng)過上述產(chǎn)酶條件的優(yōu)化，突變菌株WY-02的產(chǎn)酶峰值可達(dá)15.3 U/g。
　　 對誘變菌株降解后的油菜秸稈中木質(zhì)素官能團(tuán)的變化采用紅外光譜法進(jìn)行分析，探索誘變菌株對油菜秸稈中木質(zhì)素的

4、生物降解機(jī)制。從圖譜可以看出，1635cm-1處表征木質(zhì)素中與苯環(huán)相連的C=O伸縮振動明顯減弱；苯環(huán)的特征吸收峰（1515cm-1）由尖峰變?yōu)樾〉募绶?；表征木質(zhì)素中CH2變形振動的吸收峰（1460cm-1）變得不明顯；1324cm-1處的吸收峰明顯增強(qiáng)；具有木質(zhì)素的特征苯環(huán)取代物，其譜峰分別為1241cm-1（紫丁香基的C-O）和1057cm-1（愈創(chuàng)木基的O-H）處的振動減弱。從以上分析可以看出，油菜秸稈經(jīng)誘變菌株降解，其木質(zhì)素結(jié)構(gòu)發(fā)