甘薯ACE抑制肽的制備及其降血壓活性研究.pdf

1、甘薯加工產(chǎn)生的大量廢液中富含蛋白,而甘薯蛋白是具有顯著的加工和保健特性的優(yōu)質(zhì)植物蛋白,其經(jīng)回收利用可減少資源的浪費(fèi)及環(huán)境污染,因此,研究甘薯蛋白酶解產(chǎn)物的降血壓活性具有重要的理論意義和實(shí)踐價(jià)值。本研究采用胃蛋白酶水解甘薯蛋自制備ACE抑制肽,并對(duì)其進(jìn)行分離、純化和結(jié)構(gòu)的測(cè)定,同時(shí)探討了甘薯蛋白肽對(duì)原發(fā)性高血壓大鼠血壓的影響。
　　 利用胃蛋白酶水解甘薯蛋白制備ACE抑制肽,通過(guò)單因素試驗(yàn)和四元二次回歸正交旋轉(zhuǎn)組合設(shè)計(jì),考察底物濃

2、度、酶與底物濃度比、pH值和溫度對(duì)ACE抑制率的影響,確定了酶解甘薯蛋白的最適條件為:底物濃度23％,酶與底物濃度比3.7％,pH值2.3,溫度37℃,時(shí)間8h。
　　 甘薯ACE抑制肽經(jīng)超濾后分為三個(gè)分子量范圍的組分即0-3kDa、3-5kDa、5-10kDa,三種組分的ACE抑制率均隨著濃度的上升逐漸增大呈現(xiàn)劑量依賴性。其中分子量小于3kDa的組分ACE抑制效果最好IC50值為0.6661mg／ml,而分子量為5-10kDa

3、的組分活性最差。通過(guò)MALDI-TOF-MS檢測(cè)甘薯ACE抑制肽(0-3kDa組分)的分子量在212Da-2550Da之間,其中分子量為1384Da、1131Da、985Da及815Da的多肽含量較多。通過(guò)反相高效液相色譜法測(cè)定其氨基酸組成,發(fā)現(xiàn)其中疏水性、芳香族和支鏈氨基酸含量較高,分別為29.8g／100g Peptide、8.41 g／100g Peptide和12.94g／100g Peptide。
　　 此外,甘薯蛋白

4、肽對(duì)原發(fā)性高血壓大鼠(SHR)具有短期和長(zhǎng)期降壓功效,且可顯著低降低SHR血清中ET-1的水平,而對(duì)SHR的心率、體重和血脂水平未產(chǎn)生不利影響。一次給藥三個(gè)劑量組(600mg／kg·bw、1500mg／kg·bw和2000mg／kg·bw)的甘薯蛋白肽最大降幅均出現(xiàn)在灌胃4h后,分別為23.59mmHg、16.91mmHg和16.18mmHg。隨后血壓開(kāi)始回升,12h時(shí)基本回復(fù)到原有水平。長(zhǎng)期給藥甘薯蛋白肽24天,6天之后三個(gè)劑量組SH

5、R的收縮壓與空白對(duì)照組相比均顯著降低(P<0.05),分別為13.01mmHg、10.54mmHg和8.46mmHg。其中甘薯蛋白肽的低劑量與中劑量給藥組(600mg／kg·bw和1500mg／kg·bw)血壓下降值無(wú)顯著差異(P>0.05)。
　　 無(wú)論是一次還是多次給藥甘薯蛋白肽與卡托普利的混合物(1500mg／kg·bw+5 mg／kg·bw)對(duì)SHR血壓的降低均具有協(xié)同效果,優(yōu)于單獨(dú)使用卡托普利的功效,且可明顯降低SHR

6、血清中ET-1與AngⅡ的水平,而未見(jiàn)對(duì)SHR的生長(zhǎng)狀況、心率和血脂水平未產(chǎn)生不利影響。一次給藥蛋白肽與卡托普利的混合物和單獨(dú)給藥卡托普利在3到6h內(nèi)保持降壓活性(P<0.05),與灌胃蒸餾水的空白對(duì)照組相比,兩組的最大降幅均出現(xiàn)在灌胃3h后,分別為15.08mmHg和9.55mmHg。連續(xù)給藥24天甘薯蛋白肽與卡托普利的混合物(1500mg／kg·bw+5mg／kg·bw),發(fā)現(xiàn)二者聯(lián)用之后對(duì)SHR的血壓有顯著影響,經(jīng)6天后較之空白對(duì)