低分子量灰樹花多糖的制備和抗腫瘤活性研究.pdf

1、灰樹花菌種經(jīng)液體深層發(fā)酵生產(chǎn)菌絲體來(lái)提取多糖,本文研究了各營(yíng)養(yǎng)因子及發(fā)酵條件對(duì)灰樹花發(fā)酵的影響,并對(duì)其進(jìn)行了初步優(yōu)化,為后期實(shí)驗(yàn)獲得大量菌絲體。獲得優(yōu)化培養(yǎng)基的組成為:葡萄糖2％,蔗糖2％,蛋白胨0.6％,豆油0.1％,KH2PO40.05％,MgSO40.05％,pH6.0。
　　 菌絲體經(jīng)熱水浸提后,濃縮,3倍體積醇沉提取灰樹花粗多糖,其中主要研究了熱水浸提過程中提取溫度、料液比、提取時(shí)間、醇析濃度對(duì)提取得率的影響,獲得最佳

2、提取條件是提取溫度為80℃,料水比為1:30,提取時(shí)間為4h。然后經(jīng)sevag法脫蛋白,由于大分子量、溶解性差的雜多糖會(huì)在較稀溶劑濃度條件下首先沉淀出來(lái),然后是糖蛋白,故采用分級(jí)醇沉法去除這部分雜質(zhì),使灰樹花粗多糖得到初步純化,得到一級(jí)醇沉濃度是50％,二級(jí)醇沉濃度為80％。
　　 經(jīng)初步純化的灰樹花多糖經(jīng)過離子纖維素DEAE-纖維素52進(jìn)行離子交換層析,獲得兩種組分PGF-a和PGF-b,收集洗脫液后,經(jīng)SephadexG-2

3、5脫鹽后濃縮,再分別經(jīng)SepheracylS-400和SepheracylS-200凝膠層析進(jìn)行分離純化,結(jié)果表明PGF-a和PGF-b洗脫峰均為單一對(duì)稱峰,又同時(shí)通過采用GPC對(duì)兩種組分PGF-a和PGF-b的分子量分布范圍進(jìn)行分析,測(cè)得樣品PGF-a為含相對(duì)平均分子量不均一的混合物；樣品PGF-b為相對(duì)平均分子量比較均一的組分,所以選用其中分子量比較均一的PGF-b多糖進(jìn)行降解研究。
　　 本實(shí)驗(yàn)采用自由基法降解多糖,降解后