用灰樹花發(fā)酵米糠制備多糖.pdf

1、米糠是稻米加工過程中的副產(chǎn)品。對米糠進(jìn)行深層次的轉(zhuǎn)化，有利于提升農(nóng)副產(chǎn)品的價值，提高農(nóng)民的收入。灰樹花是一種珍貴的食藥兩用真菌?；覙浠ǘ嗵蔷哂卸喾N生理活性功能。以廉價的米糠為培養(yǎng)基，生產(chǎn)灰樹花多糖，具有一定的學(xué)術(shù)創(chuàng)新意義和實用價值。
　　 應(yīng)用紫外誘變技術(shù)，對灰樹花出發(fā)菌株Gr0301進(jìn)行處理。從5株誘變株中選出一株生物質(zhì)量和多糖產(chǎn)量明顯優(yōu)于原始菌株的突變株YUV03。突變株YUV03在2％(wt％，下同)的米糠（加水蒸煮米糠并

2、使用全部過濾液）液體培養(yǎng)基上，在250mL三角燒瓶裝樣40％、接種量10％、25℃、150r/min搖床轉(zhuǎn)速等條件下，培養(yǎng)5d，菌絲干重和總多糖的量分別比原菌株的提高了32.1％和55.2％，每100mL培養(yǎng)基分別可得2.496g和288.1mg。將YUV03菌株在綜合PDA斜面上轉(zhuǎn)接4代，未出現(xiàn)退化現(xiàn)象，表明所得突變株為所要選育得到的新菌株。
　　 研究灰樹花米糠液體培養(yǎng)基組成和液體培養(yǎng)的外部培養(yǎng)條件。采用搖瓶發(fā)酵法，在裝樣量

3、為40％、接種量為10％、搖床轉(zhuǎn)速為150r/min、溫度25℃的條件下，培養(yǎng)5d，研究不同碳源、氮源和氫離子濃度(pH值)對灰樹花菌絲體干重及胞外多糖產(chǎn)量的影響。結(jié)果表明，灰樹花深層發(fā)酵最適的碳源為葡萄糖，最適的氮源為蛋白胨。以菌絲干重、胞外多糖、胞內(nèi)多糖、總多糖為試驗指標(biāo)，對碳源、氮源和氫離子濃度進(jìn)行正交試驗，綜合考慮各指標(biāo)得到的優(yōu)化培養(yǎng)基為：葡萄糖4％（wt％，下同），3％的米糠，其pH值為5.0。采用優(yōu)化培養(yǎng)基，在裝樣量為40％

4、、接種量為10％、搖床轉(zhuǎn)速為150r/min、溫度25℃的條件下，培養(yǎng)5d，得到總多糖為452.4mg/100mL培養(yǎng)基。以得到的優(yōu)化米糠培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，研究灰樹花液體培養(yǎng)的外界條件，包括溫度、接種量、搖床轉(zhuǎn)速和裝樣量。以總多糖為指標(biāo)得到較優(yōu)的培養(yǎng)條件為：搖瓶裝樣量40％，溫度為25℃，轉(zhuǎn)速為170r/min。
　　 研究灰樹花米糠固態(tài)培養(yǎng)基組成和培養(yǎng)條件。在250mL三角燒瓶中裝入含15g米糠的固體培養(yǎng)基，在25℃、搖床轉(zhuǎn)速15

5、0r/min、10％的接種量的條件下，培養(yǎng)7d，研究外加不同碳源、氮源對灰樹花固態(tài)培養(yǎng)所得多糖含量的影響。結(jié)果表明，灰樹花在米糠上固態(tài)發(fā)酵最適的外加碳源為葡萄糖，最適的外加氮源為蛋白胨。針對一定量的米糠，對水分、葡萄糖、蛋白胨和pH值這四個因素分別取四個水平按L16(45)進(jìn)行正交試驗，以總多糖為指標(biāo)的最優(yōu)米糠固體培養(yǎng)基為：水分含量為65％、蛋白胨含量為0.5％、葡萄糖含量為4％、pH值為5.5。采用最優(yōu)培養(yǎng)基，250mL三角燒瓶裝入含

6、15g米糠的固體培養(yǎng)基，在25℃、搖床轉(zhuǎn)速150r/min、10％的接種量的條件下，培養(yǎng)7d，得到米糠固態(tài)發(fā)酵的多糖含量以原始米糠為標(biāo)準(zhǔn)計算為3.57％。在優(yōu)化培養(yǎng)基上，研究灰樹花固體培養(yǎng)的外界條件，包括溫度、接種量、搖床轉(zhuǎn)速和裝樣量。以多糖含量為指標(biāo)得到較好的搖瓶條件為：250mL三角燒瓶裝優(yōu)化的含15g米糠的固體培養(yǎng)基，發(fā)酵溫度為25℃，搖床轉(zhuǎn)速為170r/min，發(fā)酵時間為11天。多糖得率以原始米糠為標(biāo)準(zhǔn)計算，可達(dá)4.52％。