發(fā)酵木糖產(chǎn)乙醇的休哈塔假絲酵母誘變育種研究.pdf

1、木糖的乙醇發(fā)酵一直被人們視為木質(zhì)纖維原料生物轉(zhuǎn)化產(chǎn)生乙醇的關(guān)鍵因素，選育出乙醇產(chǎn)量較高的木糖發(fā)酵菌株，以提高木糖的轉(zhuǎn)化率及乙醇得率，是利用木質(zhì)纖維素原料生產(chǎn)燃料乙醇的基礎(chǔ)。
　　 本論文利用各種物理誘變因子及化學(xué)誘變方法對休哈塔假絲酵母(Candidashehatae)HDYXHT-01進(jìn)行誘變育種，篩選出一株能夠高效利用木糖、乙醇得率高的菌株。
　　 本文研究了休哈塔假絲酵母(Candida shehatae)HDYX

2、HT-01各種物理誘變劑量和致死率、正變率的關(guān)系，三種物理誘變方法對其發(fā)酵木糖產(chǎn)乙醇的能力均有影響，將這三種物理誘變方法誘變后的高產(chǎn)乙醇菌株傳代10次后，再次發(fā)酵測定其乙醇產(chǎn)量及乙醇得率，其中He-Ne激光誘變效果最為明顯，得到突變株HN-3的乙醇得率為0.3828g/g，產(chǎn)乙醇量為18.49g/L，原始菌株HDYXHT-01的乙醇產(chǎn)量為15.31g/L，相比提高了17.20％。
　　 將HN-3進(jìn)行NTG誘變，誘變劑量為NTG

3、終濃度0.4mg/mL、誘變時(shí)間15min，致死率為75.83％，正變率為39.47％。TTC雙層平板法篩選得到9株顏色較深的突變株，發(fā)酵木糖后利用高效液相色譜法測定其乙醇產(chǎn)量及木糖利用量，得到突變株NTG-2的乙醇產(chǎn)量最高，達(dá)到24.20g/L，而出發(fā)菌株HN-3的乙醇產(chǎn)量為21.00g/L，相比提高13.20％；NTG-2的乙醇得率為0.4375g/g，與出發(fā)菌株HN-3相比分別提高了13.37％。
　　 采用連續(xù)傳代的方法

4、研究了NTG-2菌株的遺傳穩(wěn)定性，結(jié)果表明，連續(xù)傳代10次后，菌株發(fā)酵性能與初代菌株相比無明顯變化。
　　 搖瓶發(fā)酵NTG-2菌株48h后，測得其乙醇產(chǎn)量24.16g/L，木糖利用率、乙醇得率和乙醇產(chǎn)率分別達(dá)到69.26％，0.4360g/g和0.7075g/(L·h)。
　　 由此可見，物理誘變因子與化學(xué)誘變相結(jié)合可以有效提高休哈塔假絲酵母發(fā)酵木糖的乙醇產(chǎn)量，這為進(jìn)一步利用該酵母進(jìn)行玉米芯半纖維素水解液發(fā)酵產(chǎn)乙醇奠定了