灰棗離體葉片高效再生體系建立的研究.pdf

1、棗（ZizyphusjujubaMill.）為鼠李科棗屬植物，是我國第一大干果樹種和最具代表性的民族果樹之一?；覘椖透珊怠Ⅰけ『望}堿，抗干熱風(fēng)，結(jié)果早，是優(yōu)良的鮮食和制干兼用型品種，但其也存在病蟲害嚴(yán)重，落花落果嚴(yán)重等缺陷。離體葉片再生技術(shù)是果樹細(xì)胞水平的誘變育種、變異篩選、嵌合體分離及基因轉(zhuǎn)移等方面的基礎(chǔ)，目前已有民勤小棗、沾化冬棗、駿棗、毛葉棗等十幾個品種的棗葉片再生體系建立成功，但未見有關(guān)灰棗離體葉片再生體系建立的報道。

2、本論文以灰棗為試材，分別通過愈傷組織分化不定芽、直接再生不定芽、不定根分化不定芽三種途徑，研究各種因素如外植體條件、基本培養(yǎng)基類型、激素種類和濃度、光照條件、添加物等對灰棗不定芽再生過程的影響，優(yōu)化各種條件，以期建立一個適合灰棗的高效、穩(wěn)定再生體系。主要實驗結(jié)論如下： （1）灰棗葉片愈傷組織的誘導(dǎo)宜選擇組培苗葉片為外植體；苗莖中部葉片的愈傷組織誘導(dǎo)率高于莖頂部和下部的葉片愈傷組織誘導(dǎo)率，以第3-5片深綠色，平展，大而厚的葉片為佳

3、；接種前不傷葉緣、垂直于主脈橫切3-5刀，與縱切和不切相比，愈傷組織誘導(dǎo)率可提高到65.44％；接種方向?qū)θ~片愈傷組織的誘導(dǎo)影響不顯著；暗培養(yǎng)可加速愈傷組織發(fā)生進(jìn)程，適宜的暗培養(yǎng)時間為14d。葉片愈傷組織誘導(dǎo)的最適培養(yǎng)基為1/2MS附加6-BA0.5mg/L，2，4-D2.0mg/L，AgNO30.5mg/L，愈傷組織誘導(dǎo)率可達(dá)到96.67％。由葉片誘導(dǎo)的愈傷組織，只有黃綠色，致密的愈傷組織在分化培養(yǎng)基上培養(yǎng)3代（5周轉(zhuǎn)接一次，為一代）

4、后才可分化出芽，將其切成0.5c㎡大小接種于分化培養(yǎng)基，在MS附加6-BA3.0mg/L和IBA0.2mg/L培養(yǎng)基上分化率為13.77％，且一個愈傷組織塊上只能分化出一個芽；在MS附加ZT2.0mg/L和IBA0.1mg/L培養(yǎng)基上能分化出叢生芽，分化率可達(dá)37.34％。 （2）葉片直接再生不定芽的最適培養(yǎng)基為WPM+NAA0.2mg/L+TDZ0.5mg/L；最佳外植體為灰棗組培苗中部平展，大而厚葉片；不定芽多在近葉柄處發(fā)生

5、，再生率比近葉尖處高59.74％；以近軸面接觸培養(yǎng)基接種較以遠(yuǎn)軸面接觸培養(yǎng)基接種的再生率高16.81％；提高蔗糖濃度到40g/L可降低再生芽的玻璃化程度；適當(dāng)時間的暗培養(yǎng)可以提高灰棗葉片再生能力，以10d的暗培養(yǎng)處理最佳；添加AgNO30.5mg/L葉片再生率可提高到82.25％，平均每葉片再生芽數(shù)為2.64個。 （3）灰棗組培苗葉片不定根誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基為1/2MS附加NAA0.3mg/L和IBA2.0mg/L，誘導(dǎo)率為92.

6、95％，誘導(dǎo)的不定根乳白色，粗壯。將不定根切成0.5cm的小段接種于WPM附加TDZ1.0mg/L和NAA0.2mg/L的分化培養(yǎng)基上，分化率可達(dá)44.51％，平均每不定根再生芽數(shù)2.08個。 （4）將分別通過愈傷組織再生、直接再生和不定根再生三種途徑誘導(dǎo)的不定芽接種到繼代增殖培養(yǎng)基MS+6-BA2.0mg/L+IBA0.5mg/L+KT0.5mg/L，培養(yǎng)至35d，增殖系數(shù)為3.06。 （5）將繼代增殖的再生苗切成2c