抗氧化大豆多肽制備和純化的研究.pdf

1、大豆多肽是大豆蛋白經(jīng)過控制性水解、精制以后得到的一類外源性生物活性肽，通常由3-50個氨基酸組成。本試驗旨在基于國內(nèi)外研究，即對抗氧化多肽分子結(jié)構(gòu)、分子大小與抗氧化生理功能的聯(lián)系，短時、高產(chǎn)率、低成本制備具有較強抗氧化能力的大豆多肽，并經(jīng)過分離純化手段去除低效組分，有效地提高抗氧化大豆多肽制品的質(zhì)量，為抗氧化大豆多肽產(chǎn)品的進一步開發(fā)、生產(chǎn)奠定基礎(chǔ)。
　　 抗氧化多肽分子結(jié)構(gòu)是由選用的酶決定的，而分子大小是由水解程度決定的。以大豆

2、蛋白為底物，分別用胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠蘿蛋白酶、中性蛋白酶和堿性蛋白酶在各自的最適條件下進行水解，比較酶解物的抗氧化活性。結(jié)果表明菠蘿蛋白酶、中性蛋白酶和堿性蛋白酶酶解物具有較高的還原能力、清除超氧陰離子自由基和過氧化氫的能力。篩選制備抗氧化大豆多肽的水解酶及水解條件，得到高效的抗氧化大豆多肽制品，結(jié)果表明：選擇1000U/g菠蘿蛋白酶、2000U/g中性蛋白酶、2000U/g堿性蛋白酶，三酶復(fù)合在pH6.0，酶解溫度50℃，底物濃

3、度8.0％的酶解條件下，對大豆蛋白酶解4小時，多肽的抗氧化能力表現(xiàn)最強，還原能力達到0.898，超氧陰離子自由基的清除率達到40.93％，過氧化氫的清除率達到33.37％。在此步驟先確定利用復(fù)合酶酶解大豆蛋白的最佳酶解溫度、底物濃度和pH，然后以抗氧化為指標篩選酶解時間，從而達到酶作用于大豆蛋白的高效性。
　　 利用超濾技術(shù)分離大豆蛋白酶解物，多肽(5-10KDa)表現(xiàn)出較強的還原能力，且由tricine-SDS-PAGE電泳驗

4、證得分子量比較集中，多肽種類相對較少；而表現(xiàn)出較強的清除超氧陰離子自由基和過氧化氫的能力，分子量不集中，多肽種類相對較多。利用高速逆流色譜技術(shù)(HSCCC)對多肽(＜5KDa)進行分離，并利用反相高效液相色譜技術(shù)(RP-HLPC)進一步純化，得到的多肽的清除超氧陰離子自由基和過氧化氫的能力分別為50.2％±0.89和49.14％±0.11，相對大豆蛋白酶解物分別提高了43.72％和71.64％；但是還原能力還是不及經(jīng)超濾得到的分子量范圍