比目魚皮抗氧化肽的制備及分離純化.pdf

1、本文以比目魚加工廢料中的魚皮為原料,制備出具有較強(qiáng)抗氧化功能的膠原蛋白肽粉,測定其抗氧化活性,對抗氧化肽分離純化研究。設(shè)計(jì)了年產(chǎn)10噸膠原蛋白肽粉的工藝,研制了兩種含膠原蛋白肽的配方。主要研究內(nèi)容如下:
　　(1)比目魚皮的預(yù)處理工藝優(yōu)化。對比5％Na2CO3溶液、0.05MTris-HCl、異丙醇:乙醚=1:1(v/v)等溶劑的脫脂效果,篩選出異丙醇:乙醚=1:1(v/v)作為脫脂劑,得到脫脂工藝參數(shù)為:脫脂時(shí)間為36h,脫脂溫

2、度為20℃,料液比為1:10。對比0.1MNaOH溶液、2.5%NaCl、6.5%NaCl等試劑的除雜蛋白的效果,篩選出0.1MNaOH作為除雜試劑,得到的除雜工藝參數(shù)為:料液比為1:30,除雜時(shí)間為36h,除雜溫度10℃。
　　(2)比目魚皮膠原多肽的制備工藝優(yōu)化。以水解度和多肽得率為指標(biāo),篩選出最佳水解酶為中性蛋白酶:胰蛋白酶=1:1(U/U),確定的水解時(shí)間為4h。以pH、溫度、酶用量為因素,對酶解工藝進(jìn)行曲面響應(yīng)優(yōu)化,水解

3、度和多肽得率兩個(gè)模型均是顯著的,在最佳工藝參數(shù)pH7.3,溫度51.8oC,E/S2776U/g條件下,最終的水解度為19.5%,多肽得率為68.28%,且試驗(yàn)值和理論值吻合較好。液質(zhì)聯(lián)用測得所制備的膠原多肽分子量集中分布在900~1600Da之間。氨基酸分析儀測得該膠原多肽含有豐富的抗氧化活性氨基酸。進(jìn)一步對比目魚皮膠原多肽的抗氧化活性進(jìn)行測定表明,膠原多肽具有較好的自由基清除能力(膠原多肽的濃度為5mg/ml時(shí),羥基清除率39.8%

4、、超氧根清除率32.2%、DPPH清除率15.38%),同時(shí)具有較強(qiáng)的還原能力、脂質(zhì)過氧化抑制能力、亞鐵離子螯合能力。
　　(3)比目魚皮抗氧化肽的制備工藝優(yōu)化及分離純化。以DPPH清除率為指標(biāo),篩選出制備抗氧化肽的最佳單酶為胰蛋白酶。以pH、溫度、酶用量為因素,對制備抗氧化肽的酶解工藝進(jìn)行曲面響應(yīng)優(yōu)化,得最佳工藝參數(shù):pH6.62,溫度48.2oC,E/S2840U/g。在此最佳工藝參數(shù)下,抗氧化肽的DPPH清除能力為23.09

5、%,且試驗(yàn)值和理論值吻合較好。依次經(jīng)SephadexG-25凝膠過濾、SephadexG-10凝膠過濾、RP-HPLC等分離方法,得到純度較高的組分。
　　(4)年產(chǎn)10噸膠原多肽的工藝設(shè)計(jì)。設(shè)計(jì)開發(fā)了以比目魚皮為原料年產(chǎn)10噸膠原多肽生產(chǎn)工藝,其中膠原多肽的得率為60.82%,純度為75.05%。對工藝進(jìn)行了經(jīng)濟(jì)效益分析,可實(shí)現(xiàn)年銷售收入500萬元,凈利潤達(dá)322.4萬元。
　　(5)開發(fā)配制了兩種含膠原蛋白肽的配方。研究