仿刺參腸道組織多肽的制備及抗氧化活性研究.pdf

1、本課題以仿刺參腸道組織為原料，首先對其營養(yǎng)成分進行測定，繼而選用單因素法及響應(yīng)面法對木瓜、風(fēng)味還有復(fù)合蛋白酶這三種蛋白酶進行酶解工藝優(yōu)化。對得到的不同分子量肽段的梯級肽進行化學(xué)抗氧化性研究及細胞損傷保護作用，最后以得率和活性為目的分離純化多肽。
　　主要研究內(nèi)容如下：
　　1.仿刺參腸道組織基本營養(yǎng)成分的測定
　　仿刺參腸道組織作為海參加工過程中的副產(chǎn)品，蛋白含量豐富，其粗蛋白含量達到63.056g/100g?？勺鳛橹?/p>

2、備多肽的原材料。
　　2.仿刺參腸道組織酶解工藝條件優(yōu)化
　　首先綜合考慮生產(chǎn)可行性、產(chǎn)品安全性、產(chǎn)品風(fēng)味鮮香等因素，篩選蛋白酶的種類，以酶解時間、酶解溫度及加酶量三個因素對酶解條件進行優(yōu)化，利用響應(yīng)面法確定最佳酶解工藝條件。最后以木瓜蛋白酶在溫度50.10℃、時間2.84h、加酶量2.639萬U條件下實際水解度達到41.82％。
　　本實驗采用的三種外源中性蛋白酶，結(jié)合仿刺參腸道組織中自身溶解酶，形成的多酶體系，結(jié)果

3、表明其酶解工藝條件優(yōu)化合理有效，在安全的基礎(chǔ)上不僅提高了水解度，而且得到了顏色鮮亮狀態(tài)澄清均勻且風(fēng)味鮮香濃郁的酶解液，其可利用作為開發(fā)風(fēng)味獨特的功能性食品。
　　3.梯級肽的分離制備及活性研究
　　本實驗通過優(yōu)化超濾的步驟，采用梯度稀釋法，木瓜蛋白酶為活性酶，分離仿刺參腸道組織的酶解液。結(jié)果表明經(jīng)過四次超濾，小于該膜包的多肽已基本濾過完全，達到了分離純化的目的。實驗共得到四個分子量大小范圍的多肽，即小于650、650～100

4、0、1000～10000及大于10000 u這4個肽段的多肽，命名為T3、T2、T1、T0，其含量分別為95.32%、2.57%、1.70%、0.41%。
　　在對T1、T2、T3的化學(xué)抗氧化性的測定中，結(jié)果顯示：T1、T2、T3都具備非常不錯的清除DPPH自由基，抗超氧陰離子以及清除羥自由基的能力，且在一定范圍內(nèi)，樣品的清除即抗化學(xué)氧化能力的大小與濃度呈正相干。其中，T3清除 DPPH自由基及抗超氧陰離子能力優(yōu)于T1及T2，而抗

5、羥基自由基能力T3與T2的抑制能力相當(dāng)并高于T1。
　　對分離得到的仿刺參梯級肽進行原代巨噬細胞或氧化氫損傷保護能力檢測，通過過建立H2O2損傷原代巨噬細胞模型，選取H2O2的濃度為160μmol/L，利用MTT法檢測各肽段樣品對原代巨噬細胞的H2O2損傷保護作用，其結(jié)果表明，各肽段樣品均具有明顯的細胞損傷保護能力，其中T3肽段保護效果更佳。
　　4.仿刺參腸道組織多肽純化及分析
　　本實驗利用大孔吸附樹脂層析法，對超

6、濾所得到的T3肽段進行的進純化分離，并對分離的組分進行抗氧化性檢測，測定其分別清除DPPH自由基和超氧陰離子的能力。T3大孔吸附樹脂層析分離所得5個成分即F1、F2、F3、F4和F5，含量分別為5.657%、29.032%、16.543%、32.862%、15.682%，通過測定清除自由基能力及得率綜合分析，選用F2作為進一步分離純化。
　　本實驗通過高速逆流色譜，對大孔吸附樹脂分離所得的F2組分進行進一步的分離純化，用于高速逆流