乳糖酶基因在畢赤酵母中的表達(dá)鑒定、發(fā)酵工藝優(yōu)化及發(fā)酵液后處理的研究.pdf

1、β-D-半乳糖苷半乳糖水解酶(β-D-galactoside galactohydrolase，EC 3.2.1.23)通常被稱為乳糖酶(Lactase)。該酶可將乳糖水解成為半乳糖與葡萄糖，同時(shí)也具有半乳糖苷的轉(zhuǎn)移作用。β-半乳糖苷酶主要應(yīng)用在生產(chǎn)低乳糖乳制品以及緩解絕大多數(shù)亞洲人食用乳制品時(shí)造成的乳糖吸收不良和乳糖不耐受的問(wèn)題。但目前在我國(guó)乳糖酶的應(yīng)用還未得到廣泛推廣，主要原因就是乳糖酶產(chǎn)量低，銷(xiāo)售價(jià)格過(guò)高，應(yīng)用成本昂貴，不能滿足食

2、品和乳制品工業(yè)的需要。而基因工程技術(shù)的發(fā)展，為研制出產(chǎn)量高、酶學(xué)性質(zhì)優(yōu)良、工藝簡(jiǎn)便、成本低、更適合食品工業(yè)生產(chǎn)的乳糖酶提供了有效的途徑。 本試驗(yàn)利用基因工程技術(shù)，構(gòu)建真核表達(dá)載體pPIC9-cDNA，并且利用畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)成功的高效分泌表達(dá)了來(lái)源于亮白曲霉的乳糖酶，表達(dá)量達(dá)6g/L。在此基礎(chǔ)上對(duì)高表達(dá)菌株的插入位點(diǎn)進(jìn)行了鑒定，結(jié)果顯示1<'＃>、7<'＃>初步認(rèn)為整合方式相同，并且與25<'＃>整合方式不同，這為尋找高表達(dá)的菌

3、株與插入位點(diǎn)之間的關(guān)系，為獲得高表達(dá)菌株奠定理論基礎(chǔ)。 同時(shí)在小試水平對(duì)乳糖酶的發(fā)酵工藝進(jìn)行了研究和優(yōu)化，成功的摸索出乳糖酶發(fā)酵的最佳條件為10％接種量，溫度30℃，pH5.2，菌體生長(zhǎng)時(shí)間24～28h，甲醇添加量由DO控制，誘導(dǎo)方式首先采取了葡萄糖一甲醇混合物進(jìn)行過(guò)渡期，隨后是甲醇誘導(dǎo)的方式，這將為乳糖酶大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)提供借鑒。最后，根據(jù)乳糖酶發(fā)酵液中顏色較深，鹽濃度高等特點(diǎn)和后期純化工藝的要求，選擇了膜分離技術(shù)來(lái)處理發(fā)酵液