乳糖酶基因的克隆、表達(dá)及序列分析.pdf

1、南方醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文乳糖酶基因的克隆、表達(dá)及序列分析姓名：王政申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：馬文麗20090501中文摘要行同源性分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)與乳糖分解酵素的同源性高達(dá)到9 9 ％，而其他卻較低，分別是鏈球菌4 9 ％；乳酸茵4 6 ％；酪酸梭狀芽胞桿菌4 5 ％：產(chǎn)氣莢膜梭菌4 5 ％；長(zhǎng)雙歧桿菌4 5 ％。2 、乳糖酶的表達(dá)重組質(zhì)粒p G M ．仇a c Z 經(jīng)測(cè)序正確后，進(jìn)行酶切，所得目的片段克隆到表

2、達(dá)載體p G E X 一6 P ·1 的啟動(dòng)子下游，構(gòu)建了重組原核表達(dá)質(zhì)粒p G E X - 6 p 一1 ／L a c Z 。測(cè)序無(wú)誤后轉(zhuǎn)化E ．c o l iB L 2 1 ( D E 3 ) ，經(jīng)I P T G 誘導(dǎo)獲得重組蛋白的高效表達(dá)，經(jīng)S D S ．P A G E 分析，表達(dá)產(chǎn)物的分子量約為1 4 0 k D 。同時(shí)設(shè)計(jì)不同誘導(dǎo)時(shí)間組及不同誘導(dǎo)劑I P T G 濃度組進(jìn)行表達(dá)條件的篩選及優(yōu)化：( 1 ) 以終濃度為

3、0 ．5 m m o l ／L 的I P T G 分別對(duì)含重組質(zhì)粒p G E X ．6 p - 1 ／L a c Z 的B L 2 I 菌誘導(dǎo)1 、2 、3 、4 、5 、6 h 。經(jīng)S D S ．P A G E 分析，融合蛋白在0 ．5 m m o l ／LI P T G 誘導(dǎo)3 h 時(shí)，表達(dá)量最高，利用分析軟件b a n d s c a n 5 ．0 對(duì)其凝膠灰度掃描顯示其表達(dá)量占菌體總蛋白質(zhì)量為4 1 ．9 ％；( 2 )終濃度為

4、0 ．2 、0 ．4 、0 ．6 、0 ．8 、1 ．0 m m o l ／L 的I P T G 同時(shí)對(duì)含重組質(zhì)粒p G E X ．6 p ．1 ／L a c Z的B L 2 1 菌誘導(dǎo)3 h 。經(jīng)S D S ．P A G E 分析，融合蛋白在誘導(dǎo)劑終濃度為0 ．6 m m o l ／L 時(shí)表達(dá)量最高，利用分析軟件b a n d s c a n 5 ．0 對(duì)其凝膠灰度掃描顯示其表達(dá)量占菌體總蛋白質(zhì)量為4 0 ％。．關(guān)鍵詞：乳糖酶基因 克