乳糖酶產(chǎn)生菌篩選、優(yōu)化培養(yǎng)及在低乳糖奶中的應(yīng)用.pdf

1、據(jù)估計(jì)，全世界70％的居民都有乳糖消化不良或乳糖不耐受現(xiàn)象。β-D-半乳糖苷半乳糖水解酶(β-半乳糖苷酶，E.C.3.2.1.23，俗稱乳糖酶)可以將牛奶中的乳糖水解成葡萄糖和半乳糖。利用乳糖酶來(lái)生產(chǎn)這種乳糖水解產(chǎn)品為減輕乳糖消化不良癥狀提供了一種可行的方法。 本課題從土壤和鮮牛奶中采用X-gal定性試驗(yàn)和ONPG定量試驗(yàn)對(duì)酶活性進(jìn)行測(cè)定以篩選高產(chǎn)乳糖酶的菌株。結(jié)果有21株在含有X-gal的瓊脂培養(yǎng)基上產(chǎn)生藍(lán)色菌落，5株ONPG

2、酶活較高，其中酵母菌Y6號(hào)菌株酶活最高。 通過(guò)正交試驗(yàn)和單因素試驗(yàn)確定了本實(shí)驗(yàn)室乳酸克魯維酵母菌株產(chǎn)乳糖酶的發(fā)酵培養(yǎng)基組分(W/V，％)為乳糖8、葡萄糖0.5、酵母膏0.7、尿素0.15、KH<,2>PO<,4> 1.5、MgSO<,4>。0.1、MnCl<,2> 0.01，pH 6.6～6.8。發(fā)酵產(chǎn)酶的最優(yōu)條件為：培養(yǎng)時(shí)間為18～20h，接種量(V/V)為2.5％，裝液量為30mL/250mL。平均產(chǎn)酶量可以達(dá)到1.930

3、ONPG U/mL。 采用單因素試驗(yàn)方法研究了乳酸克魯維酵母乳糖酶的性質(zhì)，該酶在pH 6.0～8.4范圍內(nèi)比較穩(wěn)定，酶作用最適pH值在6.4～6.6；最適反應(yīng)溫度為40～45℃，并具有良好的熱穩(wěn)定性；Mn<'2+>，Mg<'2+>，Na<'2+>等對(duì)酶有明顯的激活作用，而重金屬離子如Zn<'2+>，Cu<'2+>等對(duì)酶活有抑制作用。實(shí)驗(yàn)測(cè)定得該酶分別以O(shè)NPG和乳糖為底物的米氏常數(shù)為3.348mmol/L和16.873mmol