大腸桿菌核黃素中下游合成途徑的改造及生產(chǎn).pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩70頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進行舉報或認領

文檔簡介

1、本文圍繞大腸桿菌(Escherichia coli)核黃素生物合成的中下游途徑,以E.coli K-12 MG1655為出發(fā)菌株進行代謝工程改造。通過改造核黃素生物合成基因和嘌呤生物合成途徑中的關鍵基因,逐步提高核黃素的生物合成。
  本研究首先對枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)和E.coli中的核黃素生物合成途徑的相關基因進行過表達。同時構建了過表達B. subtilis和E.coli核黃素操縱子的質粒p20C

2、-Bsrib和p20C-EC10,分別轉化到野生型E. coli中,構建了菌株RF01B和RF01S。經(jīng)搖瓶發(fā)酵,菌株RF01B生產(chǎn)了200.5 mg/L核黃素,菌株RF01S生產(chǎn)了225.1 mg/L核黃素。結果表明,過表達大腸桿菌自身的核黃素生物合成基因對核黃素的積累更有效。因此,選取 RF01S菌株進行下一步地基因工程改造。
  在過量表達核黃素生物合成基因以后,核黃素生物合成的直接前體物--3,4-二羥基-2-丁酮4-磷酸

3、(DHBP)和GTP的有效利用可能是核黃素生物合成的限制因素。因此,以RF01S作為出發(fā)菌株,通過提高ribB基因的表達和改造嘌呤生物合成途徑來增加前體物的供給,進而提高核黃素的產(chǎn)量。首先,通過替換強啟動子的方式過表達ribB基因來增加5-磷酸核酮糖到DHBP的通量。其次,依然通過替換強啟動子的方式對ndk和gmk基因進行過表達來提高GTP的供給。然后,在purA基因中引入突變點來減少分支途徑IMP到AMP的通量。最后,過表達突變的pu

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論