水產(chǎn)過敏原的模擬胃腸液消化.pdf

1、近年來,食物過敏問題受到了越來越多人的關注,也被認為是食品安全問題的一個重要方面。在FAO公布的八大類主要過敏食物中,水產(chǎn)品占了兩類。雖然迄今為止已有不少關于食物過敏機理的研究報道,但食物過敏原是通過什么途徑引發(fā)過敏的以及食物過敏原在消化道中的穩(wěn)定性等問題,目前仍不是很清楚。絕大部分食物過敏原是通過腸胃接觸引發(fā)的,因此通常認為食物過敏原能耐受腸胃消化。在轉基因食品致敏性的評估方面,已經(jīng)將模擬胃腸液消化作為評價轉基因蛋白致敏性的重要指標。

2、但是近年來很多研究者對這種評估的有效性提出了質疑。所以,對該問題仍然需要進一步的研究。鋸緣青蟹(Scylla serrata)、中華絨螯蟹(Eriocheir sisensis)、斑節(jié)對蝦(Penaeus monodon)和南美白對蝦(Penaeus vannamei)等甲殼類動物肉質鮮美,營養(yǎng)豐富,是我國乃至全世界水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的重要對象。白鯽魚(Carassius auratus)、白鰱魚(Hypophthalmichthys moli

3、trix)則是我國淡水養(yǎng)殖具有重要經(jīng)濟價值的優(yōu)質魚類。我國國民由于消費上述水產(chǎn)品而引發(fā)食物過敏的報道屢見不鮮,但有關水產(chǎn)過敏原的體外模擬消化鮮見報道。
　　 本研究以上述幾種水產(chǎn)品為研究對象,通過模擬胃腸液消化試驗分析甲殼類和魚類主要過敏原(分別為原肌球蛋白和小清蛋白)的消化特性、消化過程中影響消化性的因素、消化對過敏蛋白致敏性的影響等指標,以期為解明水產(chǎn)動物過敏原的消化穩(wěn)定性以及今后開發(fā)低過敏性水產(chǎn)食品提供參考。首先,參考美國

4、藥典描述的模擬胃、腸液配方,測定了純化的甲殼類原肌球蛋白和魚類小清蛋白在體外模擬胃、腸液消化過程中的穩(wěn)定性,以十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)和免疫印跡法(Western blot)進行分析。結果發(fā)現(xiàn)在模擬胃液消化試驗中,甲殼類動物原肌球蛋白具有較高的穩(wěn)定性,而魚類小清蛋白則能被較快的分解。在模擬腸液消化試驗中,原肌球蛋白則能被不同程度地分解,并產(chǎn)生一些降解條帶,而小清蛋白則幾乎不被分解。其次,對甲殼類肌原纖維蛋白

5、和魚類肌漿蛋白進行體外模擬胃、腸液消化,比較過敏蛋白與其他蛋白消化特性的區(qū)別。結果顯示在模擬胃液中,相對于原肌球蛋白,肌球蛋白重鏈、肌動蛋白能被快速的分解;在模擬腸液消化中,蟹類肌動蛋白比原肌球蛋白要耐降解,而蝦類則相反,說明過敏蛋白不一定都比其他蛋白穩(wěn)定,消化穩(wěn)定性和過敏性沒有必然的聯(lián)系。分別采用兔抗蟹類原肌球蛋白、兔抗魚類小清蛋白特異性多克隆抗體的免疫印跡檢測粗提蛋白中過敏蛋白的分解情況,結果表明其他蛋白的存在對甲殼類原肌球蛋白和魚

6、類小清蛋白的消化特性基本沒有影響。考慮到人體的實際生理情況,研究酶/蛋白比值和pH值對模擬胃液消化過敏蛋白穩(wěn)定性的影響。結果表明,提高胃蛋白酶的相對比例有利于原肌球蛋白的降解,但是原肌球蛋白的降解產(chǎn)物具有較強的穩(wěn)定性,即使當酶/蛋白比值提高到10/1時,一些穩(wěn)定的降解條帶仍未被完全分解;當pH=5時,胃液消化會受到抑制,原肌球蛋白和小清蛋白均不會被消化分解。最后,采用免疫印跡(IgE-immunoblotting)和抑制性酶聯(lián)免疫吸附試