布氏石斑魚頭腎抗菌肽的初步分離及抗菌活性分析.pdf

1、石斑魚是我國南方重要的經(jīng)濟(jì)養(yǎng)殖品種。到目前為止,少有關(guān)于石斑魚抗菌肽的研究報(bào)道。本文以布氏石斑魚(Epinephelus bleekeri)為材料,采用醋酸提取法從其頭腎和體腎中分離出有活性的粗提物,并選擇活性較大的頭腎粗提物進(jìn)行了相關(guān)理化性質(zhì)和抑菌活性分析。
　　 1.布氏石斑魚抗菌成分的分離條件優(yōu)化
　　 目的:對(duì)布氏石斑魚體內(nèi)抗菌物質(zhì)分離條件的優(yōu)化。
　　 方法:通過對(duì)布氏石斑魚腹腔注射致病性哈氏弧菌(Vi

2、brio harveyi)或無乳鏈球菌(Streptococcus mastitidis)分別刺激8h和18h后,用醋酸提取法對(duì)布氏石斑魚粘液、鰓、頭腎、肝臟、體腎、脾臟進(jìn)行抗菌肽分離,研究布氏石斑魚各組織產(chǎn)生抗菌肽的能力和抗菌效果。
　　 結(jié)果:以大腸桿菌D31(Escherichia coli D31)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、哈氏弧菌和溶藻弧菌(V.alginolyticus)為指示菌

3、,頭腎和體腎提取物具有抑菌活性,其中頭腎提取物活性較強(qiáng);以無乳鏈球菌刺激后所得粗提物的抑菌活性好于哈氏弧菌;同一種菌刺激18h的組織提取物的抑菌效果優(yōu)于刺激8h;經(jīng)蛋白酶K處理1h后,頭腎粗提物抗菌活性消失,說明頭腎粗提物中所含的抗菌活性物質(zhì)為蛋白質(zhì)。
　　 2.布氏石斑魚頭腎抗菌成分的抗菌譜研究
　　 目的:研究布氏石斑魚頭腎抗菌肽的抗菌譜。
　　 方法:采用徑向擴(kuò)散法(Radial Diffusion Ass

4、ay,RDA)分別測(cè)定頭腎粗提物對(duì)枯草芽胞桿菌(Bacillus subtilis),河流弧菌(V.fluvialis)、副溶血弧菌(V.parahemolyticu)、解蛋白弧菌(V.proteolyticus)、擬態(tài)弧菌(V.mimicus)、銅綠假單胞桿菌(Pseudomonas aeruginosa)、創(chuàng)傷弧菌(V.vulnificus)和鰻弧菌(V.anguillarum)的抑菌活性;用酸-尿素-聚丙烯酰胺凝膠電泳(AU-PA

5、GE)彌散法來初步確定頭腎粗提物中活性物質(zhì)種類的含量。
　　 結(jié)果:RDA法檢測(cè)結(jié)果表明頭腎粗提物對(duì)解蛋白弧菌、擬態(tài)弧菌、創(chuàng)傷弧菌、河流弧菌、副溶血弧菌、枯草芽胞桿菌、銅綠假單胞桿菌和鰻弧菌均有抑菌活性;AU-PAGE彌散法結(jié)果表明頭腎粗提物中含有多種不同的抗菌活性物質(zhì)。
　　 3.布氏石斑魚頭腎抗菌成分的分子量測(cè)定
　　 目的:對(duì)布氏石斑魚頭腎抗菌成分進(jìn)行初步分離并測(cè)定其分子量大小。
　　 方法:切膠回