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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:酶法制備牡蠣活性肽并探討其誘導(dǎo)人宮頸癌Hela細(xì)胞凋亡的作用及機(jī)制。
方法:
?。?)采用響應(yīng)面法優(yōu)化了復(fù)合酶水解牡蠣蛋白的工藝。
?。?)在溫度45℃、pH8.0的條件下,通過探討底物濃度及酶濃度對(duì)水解度的影響,建立酶解牡蠣蛋白的動(dòng)力學(xué)模型。
?。?)采用Sephadex G-25柱層析法對(duì)酶解液中的牡蠣活性肽進(jìn)行分離純化,并通過Trcince-SDS-PAGE電泳和凝膠過濾層析法測(cè)定其相對(duì)分子
2、質(zhì)量大小。
?。?)以SRB(Sulfordmaine B磺基羅丹明B)比色法,臺(tái)盼藍(lán)計(jì)數(shù)法,Hochest/PI雙熒光染色法和DNA Ladder等技術(shù)方法檢測(cè)BPO(Bioactive peptides of oyster)誘導(dǎo)Hela細(xì)胞凋亡的方式,并采用流式細(xì)胞術(shù)和實(shí)時(shí)定量PCR(RT-PCR)從分子水平上分析了BPO誘導(dǎo)Hela細(xì)胞凋亡的作用機(jī)制。
結(jié)果:
?。?)牡蠣蛋白的最佳酶解工藝為:溫度45℃
3、、復(fù)合酶濃度2g/L、底物濃度15.3g/L、復(fù)合酶比(風(fēng)味蛋白酶與胰蛋白酶活力比)為2.3:1;
(2)復(fù)合蛋白酶在溫度45℃、pH8.0的條件下,水解牡蠣蛋白的動(dòng)力學(xué)方程及參數(shù)為:水解速率模型R=(40.301E0-0.4257S0)exp(-0.2176DH)和水解度動(dòng)力學(xué)模型DH=4.5956ln[1+(8.7695E0/S0-0.09263)t],動(dòng)力學(xué)失活常數(shù)Kd=8.5378min-1和米氏常數(shù)Km=3.741m
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