EGCG誘導宮頸癌HeLa細胞凋亡及其機制研究.pdf

1、目的:宮頸癌是嚴重威脅我國婦女健康的惡性腫瘤之一?；熖岣吡酥型砥趯m頸癌患者的緩解率,但由于其毒副作用和腫瘤細胞耐藥,部分患者臨床療效難盡人意。本研究旨在探討表沒食子兒茶素沒食子酸酯(Epigallocatechin-3-gallate,EGCG)體外誘導宮頸癌HeLa細胞凋亡及其機制,為開發(fā)與尋找新藥提供實驗依據(jù)。
　　方法:采用MTT法檢測EGCG抑制HeLa細胞生長的IC50值;通過普通光鏡、平皿克隆和繪制細胞生長曲線觀察

2、EGCG對 HeLa細胞生長的抑制作用;Hochest33258染色法、流式細胞儀及DNA凝膠電泳法檢測EGCG誘導HeLa細胞凋亡的情況;采用RT-PCR、免疫細胞化學染色和Western-blotting檢測了Caspase-3基因和蛋白的表達;同時運用Western-blotting檢測活化Caspase-3蛋白和裂解的PARP-1蛋白的表達情況;另外,選用免疫細胞化學染色觀察PARP-1蛋白在EGCG處理HeLa細胞后胞核與胞漿

3、的表達。
　　結果:
　　1、EGCG抑制HeLa細胞生長的IC50值為36.82mg.L-1;
　　2、普通光鏡觀察、平皿克隆和細胞生長曲線結果顯示,隨著 EGCG濃度增加,處理時間延長,對HeLa細胞生長抑制作用不斷增加,且呈濃度依賴性（n=3,P<0.05);
　　3、Hochest33258染色結果顯示,EGCG處理HeLa細胞中出現(xiàn)了典型的凋亡形態(tài)學改變如核碎裂、核濃縮等。與對照組比較,隨著 EGCG濃

4、度的增加,凋亡細胞數(shù)不斷增多(n=3,P<0.05)。
　　4、流式細胞儀檢測結果顯示,經(jīng)EGCG處理后,隨著濃度的升高,HeLa細胞的凋亡率逐漸增加,呈濃度依賴性誘導 HeLa細胞的凋亡(n=3,P<0.05)。
　　5、DNA瓊脂糖凝膠電泳檢測結果顯示,EGCG處理HeLa細胞后可見DNA梯形條帶,且隨著濃度升高,條帶越明顯。
　　6、RT-PCR檢測結果顯示,隨著ECGC濃度的升高,Caspase-3基因的表達逐

5、漸增強(P<0.05)。
　　7、Western-blotting檢測結果顯示,隨著EGCG濃度的升高,HeLa細胞中Caspase-3蛋白的表達逐漸增加(P<0.05),EGCG呈濃度依賴性誘導HeLa細胞中Caspase-3蛋白的表達。
　　8、免疫細胞化學染色檢測結果顯示,Caspase-3蛋白主要在 HeLa細胞漿中表達,且隨著EGCG濃度的升高,其表達也逐漸增加(P<0.05)。
　　9、Western-bl

6、otting結果顯示,隨著EGCG濃度的升高,HeLa細胞中活化Caspase-3蛋白和裂解的PARP-1蛋白表達均逐漸增加(P<0.05)。
　　10、免疫細胞化學染色結果顯示,PARP-1蛋白在HeLa細胞核與胞漿表達,隨著EGCG濃度的升高,PARP-1蛋白在胞漿中的表達量逐漸增加而胞核中含量減少(P<0.05)。
　　結論:
　　1、EGCG體外呈劑量依賴性抑制宮頸癌HeLa細胞生長。
　　2、EGCG體