燕麥肽的酶法制備及其生物活性功能的研究.pdf

1、我國燕麥品種資源豐富，燕麥產(chǎn)區(qū)地理和生態(tài)條件獨特。對我國特有的優(yōu)質(zhì)裸燕麥的保鍵功能進行深入的研究，開發(fā)和完善燕麥功效成分分離純化工藝，建立工業(yè)化示范生產(chǎn)線，對于我國燕麥的綜合開發(fā)利用、燕麥功效產(chǎn)品的產(chǎn)業(yè)化發(fā)展具有非常重要的市場價值和社會效益。 生物活性肽的研究領(lǐng)域發(fā)展很快，研究證實生物活性肽具有調(diào)節(jié)細胞生理功能和代謝活動、影響細胞的生長、分裂、分化、增殖和遷移的作用，到目前為止，研究發(fā)現(xiàn)的生物活性多肽有幾十種，經(jīng)常添加到美容護膚

2、品中。 關(guān)于燕麥肽的獲得方法國內(nèi)外并沒有詳細的研究，對于燕麥蛋白水解的酶和相應(yīng)的酶解技術(shù)也沒有更多的報道。特別是對于燕麥綜合加工利用，從燕麥中提取功能因子的分離技術(shù)和方法，以及燕麥肽在化妝品中的應(yīng)用，國內(nèi)外均沒有文獻報道。 本研究就是以燕麥麩作為研究對象，用三種蛋白酶Alcalase、Neutrase、Protamex酶解制備燕麥肽，利用響應(yīng)面分析法得到最佳的酶解條件，用大孔吸附樹脂分離純化多肽，并進行人體成纖維細胞實驗

3、檢測其抗衰老的功效及其測定相應(yīng)的燕麥肽的分子量分布。 研究結(jié)果如下： 1、采用Box—Benhnken響應(yīng)面分析法，以水解度(DH)及氮溶指數(shù)(NSI)為評價指標，在對溫度、pH值、加酶量、反應(yīng)時間、水料比等單因素實驗的基礎(chǔ)上，設(shè)計了3因素3水平實驗，得到了了燕麥麩蛋白酶酶解的最優(yōu)條件。結(jié)果表明，Alcalase酶的最佳條件為水料比為15，pH值加酶量為底物的5％，酶解反應(yīng)時間控制在4h，水解度值達到21.8％，氮溶指數(shù)

4、達到18.99％；Neutrase酶采用水料比為15，加酶量為底物的5％，酶解反應(yīng)時間控制在4h，水解度值達到11.59％，氮溶指數(shù)達到16.9％；Protamex酶采用水料比為15，加酶量為底物的5％，酶解反應(yīng)時間控制在4h，水解度值達到13.78％，氮溶指數(shù)達到15.53％。 2、采用DA201-C大孔吸附樹脂對燕麥肽酶解產(chǎn)物進行脫鹽及脫糖純化。結(jié)果表明，當酶解產(chǎn)物pH為4.76時，大孔樹脂對燕麥肽酶解產(chǎn)物的吸附率可達68％

5、。大孔吸附樹脂DA201-C具有較好的蛋白吸附效果且有較好的脫鹽與脫糖效果。通過檢驗，純化后燕麥肽產(chǎn)物的多肽含量比純化前含量大幅提高，由原有的32.38％提高至71.93％；而純化后糖含量大幅降低，由于原有的64.30％降低至26.60％；另外在實驗過程中帶入的無機鹽等成分基本去除。 3、觀察細胞形態(tài)，培養(yǎng)的成纖維細胞成梭形，符合培養(yǎng)條件下成纖維細胞的形態(tài)特征。采用MTT法測定燕麥肽對人皮膚成纖維細胞的增殖情況，結(jié)果表明三種酶

6、酶解得到的燕麥肽在濃度為0.005％—0.05％時，對體外培養(yǎng)的人皮膚成纖維細胞增殖有促進作用。樣品在濃度為0.05％的條件下，OD值均達到了最高值，相比較空白對照(以培養(yǎng)基代替樣品)OD值有所增加，且加入樣品組的光吸收值明顯高于細胞對照組，其中Alcalase酶解產(chǎn)物對細胞的增殖作用最顯著(P＜0.05)。 4、使用高效液相色譜精確測定具有促進成纖維細胞增殖的燕麥肽分子量在438.56至1301.01之間，通過求算峰面積可知，