燕麥肽的酶法制備及其生物活性功能的研究.pdf

1、我國(guó)燕麥品種資源豐富，燕麥產(chǎn)區(qū)地理和生態(tài)條件獨(dú)特。對(duì)我國(guó)特有的優(yōu)質(zhì)裸燕麥的保鍵功能進(jìn)行深入的研究，開發(fā)和完善燕麥功效成分分離純化工藝，建立工業(yè)化示范生產(chǎn)線，對(duì)于我國(guó)燕麥的綜合開發(fā)利用、燕麥功效產(chǎn)品的產(chǎn)業(yè)化發(fā)展具有非常重要的市場(chǎng)價(jià)值和社會(huì)效益。 生物活性肽的研究領(lǐng)域發(fā)展很快，研究證實(shí)生物活性肽具有調(diào)節(jié)細(xì)胞生理功能和代謝活動(dòng)、影響細(xì)胞的生長(zhǎng)、分裂、分化、增殖和遷移的作用，到目前為止，研究發(fā)現(xiàn)的生物活性多肽有幾十種，經(jīng)常添加到美容護(hù)膚

2、品中。 關(guān)于燕麥肽的獲得方法國(guó)內(nèi)外并沒有詳細(xì)的研究，對(duì)于燕麥蛋白水解的酶和相應(yīng)的酶解技術(shù)也沒有更多的報(bào)道。特別是對(duì)于燕麥綜合加工利用，從燕麥中提取功能因子的分離技術(shù)和方法，以及燕麥肽在化妝品中的應(yīng)用，國(guó)內(nèi)外均沒有文獻(xiàn)報(bào)道。 本研究就是以燕麥麩作為研究對(duì)象，用三種蛋白酶Alcalase、Neutrase、Protamex酶解制備燕麥肽，利用響應(yīng)面分析法得到最佳的酶解條件，用大孔吸附樹脂分離純化多肽，并進(jìn)行人體成纖維細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

3、檢測(cè)其抗衰老的功效及其測(cè)定相應(yīng)的燕麥肽的分子量分布。 研究結(jié)果如下： 1、采用Box—Benhnken響應(yīng)面分析法，以水解度(DH)及氮溶指數(shù)(NSI)為評(píng)價(jià)指標(biāo)，在對(duì)溫度、pH值、加酶量、反應(yīng)時(shí)間、水料比等單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，設(shè)計(jì)了3因素3水平實(shí)驗(yàn)，得到了了燕麥麩蛋白酶酶解的最優(yōu)條件。結(jié)果表明，Alcalase酶的最佳條件為水料比為15，pH值加酶量為底物的5％，酶解反應(yīng)時(shí)間控制在4h，水解度值達(dá)到21.8％，氮溶指數(shù)

4、達(dá)到18.99％；Neutrase酶采用水料比為15，加酶量為底物的5％，酶解反應(yīng)時(shí)間控制在4h，水解度值達(dá)到11.59％，氮溶指數(shù)達(dá)到16.9％；Protamex酶采用水料比為15，加酶量為底物的5％，酶解反應(yīng)時(shí)間控制在4h，水解度值達(dá)到13.78％，氮溶指數(shù)達(dá)到15.53％。 2、采用DA201-C大孔吸附樹脂對(duì)燕麥肽酶解產(chǎn)物進(jìn)行脫鹽及脫糖純化。結(jié)果表明，當(dāng)酶解產(chǎn)物pH為4.76時(shí)，大孔樹脂對(duì)燕麥肽酶解產(chǎn)物的吸附率可達(dá)68％

5、。大孔吸附樹脂DA201-C具有較好的蛋白吸附效果且有較好的脫鹽與脫糖效果。通過檢驗(yàn)，純化后燕麥肽產(chǎn)物的多肽含量比純化前含量大幅提高，由原有的32.38％提高至71.93％；而純化后糖含量大幅降低，由于原有的64.30％降低至26.60％；另外在實(shí)驗(yàn)過程中帶入的無機(jī)鹽等成分基本去除。 3、觀察細(xì)胞形態(tài)，培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞成梭形，符合培養(yǎng)條件下成纖維細(xì)胞的形態(tài)特征。采用MTT法測(cè)定燕麥肽對(duì)人皮膚成纖維細(xì)胞的增殖情況，結(jié)果表明三種酶

6、酶解得到的燕麥肽在濃度為0.005％—0.05％時(shí)，對(duì)體外培養(yǎng)的人皮膚成纖維細(xì)胞增殖有促進(jìn)作用。樣品在濃度為0.05％的條件下，OD值均達(dá)到了最高值，相比較空白對(duì)照(以培養(yǎng)基代替樣品)OD值有所增加，且加入樣品組的光吸收值明顯高于細(xì)胞對(duì)照組，其中Alcalase酶解產(chǎn)物對(duì)細(xì)胞的增殖作用最顯著(P＜0.05)。 4、使用高效液相色譜精確測(cè)定具有促進(jìn)成纖維細(xì)胞增殖的燕麥肽分子量在438.56至1301.01之間，通過求算峰面積可知，