枸杞多糖的分級及其細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)活性研究.pdf

1、本文以枸杞子為原料提取枸杞多糖(LBP)，選用4種不同截留分子量的超濾膜對枸杞多糖進(jìn)行分級，檢測不同組分的理化性質(zhì)，并對其細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)活性進(jìn)行研究，探討枸杞多糖分離方法、組成及理化性質(zhì)與其細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)活性之間的關(guān)系。
　　分別研究了截留分子量為80K、30K、10K、4K的超濾膜對枸杞多糖的分離條件，依次得到5個枸杞多糖組分:LBP-80，LBP-30，LBP-10，LBP-4和LBP-4p。
　　分別采用高效液相色譜法、氣

2、相色譜法、化學(xué)比色法檢測枸杞多糖的組成。測得LBP-80，LBP-30，LBP-10，LBP-4和LBP-4p的平均分子量分別為2.04×106Da，5.48×105Da，3.62×106Da，5.5×104Da和1.02×104Da。各組分單糖種類基本相同，主要由巖藻糖、鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、葡萄糖、甘露糖和半乳糖組成，各單糖比例存在著較大的差異，LBP-80中葡萄糖和鼠李糖含量低于檢出限，LBP-4p和LBP-4中鼠李糖含量低于檢

3、出限;半乳糖醛酸、中性糖、蛋白質(zhì)含量各不相同，LBP-30半乳糖醛酸含量最高，為48.41％±0.64％，LBP-4p中性糖含量最高，為33.93％±5.02％，LBP-80蛋白質(zhì)含量最高，為7.72％±0.06％。原子力顯微鏡觀察多糖形貌顯示，LBP-80平面圖顯示部分呈團(tuán)聚狀，球狀分枝狀散布其間;LBP-30分子聚集在一起呈團(tuán)絮狀分布;LBP-10呈分布較分散的絮狀和球狀，有少量斷鏈分支的存在;LBP-4多為球狀或團(tuán)聚狀，有大量尖狀

4、突起;LBP-4p呈粒徑較大的球狀，分布均勻，沒有鏈狀分支的存在，表面較為平整。DSC檢測結(jié)果顯示，LBP-30和LBP-4吸熱峰較尖窄，而LBP-80和LBP-10吸熱峰寬而平，可能由于LBP-30和LBP-4分子量范圍相對集中，組分相對均一，使其熱力學(xué)變化溫度較穩(wěn)定。LBP-4p吸熱曲線上出現(xiàn)大量不規(guī)則的細(xì)微的曲線斜率的變化，可能由于該組分極易吸潮，水分含量的變化影響其熱力學(xué)變化的溫度。
　　分別采用MTT法、流式細(xì)胞儀、形態(tài)

5、學(xué)觀察等方法檢測枸杞多糖對人肝癌細(xì)胞SMMC-7721細(xì)胞生長的影響，結(jié)果表明，枸杞多糖超濾組分LBP-4p、LBP-10、LBP-4、LBP-80具有抑制肝癌細(xì)胞SMMC-7721增殖的作用，LBP-4p和LBP-10細(xì)胞抑制活性較高，最高抑制率為56.1％±1.4％;細(xì)胞出現(xiàn)胞漿濃縮，細(xì)胞拉長，互相分散等形態(tài)變化;熒光染色后觀察，細(xì)胞核明顯變小，熒光分布不均勻，出現(xiàn)熒光碎片;LBP-4p可使人肝癌細(xì)胞SMMC-7721的細(xì)胞周期阻滯