羊乳和牛乳理化特性比較及其摻假檢測研究.pdf

1、乳制品的質(zhì)量與安全問題的核心就是控制好乳源。本課題對羊乳和牛乳的蛋白質(zhì)含量及組分、酒精穩(wěn)定性和凝乳特性做了比較研究,并且以牛α-乳白蛋白和α-酪蛋白為目標(biāo)蛋白,建立了可以快速、靈敏、準(zhǔn)確地檢測羊乳中摻入牛乳含量的直接競爭ELISA法。
　　 羊乳和牛乳理化特性比較研究。以脫脂的羊乳和牛乳為樣品,通過凱氏定氮法和SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳測定羊乳和牛乳的蛋白質(zhì)含量及其蛋白質(zhì)組分。測得,羊乳的蛋白質(zhì)含量高于牛乳的,分別為(3.43±

2、0.06)g/100mL和(3.19±0.07)g/100mL(置信度95%);兩者的蛋白組分也存在一定的差異,通過圖譜可以看出,牛乳的酪蛋白中以α-酪蛋白含量最多,而羊乳中以β-酪蛋白含量最多。準(zhǔn)備原料乳、巴殺乳和冷凍復(fù)融乳乳樣,測得羊乳乳樣的酒精穩(wěn)定性值依次為46±1、42±2、40±1(%,V/V),凝乳時(shí)間依次為297±2、310±2、266±2(S);牛乳乳樣的酒精穩(wěn)定性值依次為78±1、78±1、78±1(%,V/V);凝乳

3、時(shí)間依次為571±3、590±1、485±1(S)。實(shí)驗(yàn)證明,羊乳的膠體穩(wěn)定性比牛乳的差。
　　 兔抗牛α-乳白蛋白和α-酪蛋白抗體的制備與特性研究。以牛α-乳白蛋白和α-酪蛋白為抗原,免疫新西蘭大白兔,采集高效價(jià)血清。依次采用飽和硫酸銨分級沉淀法和蛋白A親和色譜法純化血清抗體,得到純化兔抗牛α-LA-IgG和α-CN-IgG樣品。效價(jià)均可達(dá)到1:16000,蛋白質(zhì)含量分別為0.35mg/mL,0.43mg/mL,純度分別為88

4、.31%、89.23%。硫氰酸銨洗脫法測得α-LA-IgG和α-CN-IgG對α-LA的親和力指數(shù)分別為2.6mol/L、1.1mol/L,對α-CN的親和力指數(shù)分別為1.6mol/L、2.5mol/L。Anti-α-LA-IgG特異性很好,anti-α-CN-IgG與κ-CN和β-CN存在一定交叉反應(yīng),兩種抗體均與羊乳存在一定的交叉反應(yīng)。經(jīng)抗體修飾技術(shù)處理后,這些交叉反應(yīng)均明顯降低。
　　 牛乳α-乳白蛋白和α-酪蛋白的酶標(biāo)記

5、。選用辣根過氧化物酶,通過過碘酸鈉氧化法分別標(biāo)記α-乳白蛋白和α-酪蛋白。結(jié)果顯示,當(dāng)HRP與α-LA的分子個(gè)數(shù)比為1.5:1時(shí),標(biāo)記效果比較好(結(jié)合率25.4%,標(biāo)記率85.7%);α-CN的分子個(gè)數(shù)比也為1.5:1時(shí),標(biāo)記效果比較好(結(jié)合率43.8%,標(biāo)記率84.49%)。經(jīng)ELISA檢測,酶標(biāo)抗原的效價(jià)分別可以達(dá)到1:320和1:640。
　　 直接競爭ELISA方法的建立。棋盤滴定法確定抗體最佳包被濃度(anti-α-L

6、A-IgG和anti-α-CN-IgG分別為1:160,1:320)和酶標(biāo)抗原最佳稀釋濃度(都為1:20)。確定封閉液1%G的體積為200μL,封閉時(shí)間為1h。脫脂乳的最佳稀釋度為1:80。用anti-α-LA-IgG和anti-α-CN-IgG分別建立直接競爭ELISA法檢測羊乳中摻入的牛乳含量。經(jīng)評價(jià)指標(biāo)分析,該方法的檢測線性范圍都為0%～50%(V/V),最低檢測限分別為2.5%和4%,變異系數(shù)小于5%。
　　 本研究通過