聚甲基丙烯酸甘油酯胺基衍生物、硫脲衍生物的合成及其作為基因載體的性能研究.pdf

1、研究發(fā)現(xiàn)硫脲基團可以與pDNA上的磷酸基團產生較強的作用。在本研究中，第一步，通過原子轉移自由基聚合(ATRP)合成分子量分布較窄的線型和五臂的聚甲基丙烯酸甘油酯（L-PGMA/S5-PGMA）;第二步，利用不同的二胺三胺，如丁二胺(B)，乙二胺(E)和二乙烯三胺(D)，對PGMA進行聚合后修飾，得到不同胺基修飾不同胺基取代率的胺基聚甲基丙烯酸甘油酯（胺基PGOHMAs），包括L-B，S5-B，L-E，S5-E和L-D;第三步，繼續(xù)用異

2、硫氰酸甲酯(M)，異硫氰酸丙酯(P)對胺基PGOHMAs進行聚合后修飾，得到不同異硫氰酸酯修飾不同硫脲轉化率的聚甲基丙烯酸甘油酯硫脲衍生物(TPGOHMAs)，包括L-BM，L-BP，S5-BM，L-EM，S5-EM和L-DM（其中M代表異硫氰酸甲酯，P代表異硫氰酸丙酯）。對所合成的胺基PGOHMAs和TPGOHMAs高分子進行核磁共振光譜(1HNMR)，傅里葉紅外光譜(FT-IR)，凝膠滲透色譜(GPC)，pH滴定及元素分析等表征，得

3、到了修飾成功的高分子。
　　 根據高分子中N元素含量與pDNA中磷酸基團的P元素含量，將所得到的高分子與pDNA構造為不同N/P摩爾比例的復合體，對其作為基因載體的的性質進行研究。通過凝膠電泳實驗得到TPGOHMAs比胺基PGOHMAs有更強的負載pDNA的能力。通過透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn):TPGOHMAs/pDNA復合體和胺基PGOHMAs/pDNA復合體都是規(guī)則球形粒子，并且粒徑范圍在60士33nm，比動態(tài)光散射實驗(DLS)所測

4、定的粒子水合粒徑要小。zeta電勢測定結果顯示:TPGOHMAs/pDNA復合體比胺基PGOHMAs/pDNA復合體擁有更低的粒子電勢。有趣的是，凝膠電泳和溴化乙錠(EB)置換實驗都說明:與胺基PGOHMAs相比，TPGOHMAs能在較低的N/P比下與pDNA復合。MTT細胞毒性實驗結果表明:TPGOHMAs高分子顯示出比胺基PGOHMAs更低的細胞毒性。在Huh-7細胞體外轉染實驗中，除L-DM/pDNA復合體外，其余TPGOHMAs