蘇丹紅Ⅰ號(hào)對(duì)HepG2細(xì)胞的遺傳毒性及氧化性DNA損傷.pdf

1、蘇丹紅I號(hào)(1-Phenylazo-2-hydroxynaphthol，Sudan I)是一種人工合成的脂溶性偶氮化合物，廣泛地應(yīng)用于各種工業(yè)生產(chǎn)。但是全球多數(shù)國(guó)家都禁止將其應(yīng)用于食品生產(chǎn)中。 早在1975年，國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)(International Agency for Researchon Cancer，IARC)就將蘇丹紅Ⅰ號(hào)歸為第三類致癌物。研究發(fā)現(xiàn)，用體內(nèi)、體外遺傳毒性試驗(yàn)檢測(cè)蘇丹紅Ⅰ號(hào)的遺傳毒性，其結(jié)果大多顯示陽(yáng)

2、性。蘇丹紅I號(hào)通過(guò)多種途徑代謝，在其代謝過(guò)程中產(chǎn)生活性氧(ROS)，其作用的靶器官是肝臟。受此啟發(fā)，我們?cè)囂接懱K丹紅Ⅰ號(hào)產(chǎn)生遺傳毒性，是否與活性氧引起的氧化性DNA損傷有關(guān)。本研究選用的是一種代謝完全的人類來(lái)源的肝腫瘤細(xì)胞株HepG2細(xì)胞，它不僅保持了人正常肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞的許多功能，還保留了一系列生物轉(zhuǎn)化過(guò)程中的Ⅰ相和Ⅱ相酶，是檢測(cè)外來(lái)化合物遺傳毒性的理想細(xì)胞系。 本研究選用HepG2細(xì)胞，研究蘇丹紅Ⅰ號(hào)的遺傳毒性及DNA氧化性損傷

3、的機(jī)制，為評(píng)估蘇丹紅Ⅰ號(hào)對(duì)人類的健康危害提供實(shí)驗(yàn)資料。 方法： 以HepG2細(xì)胞作為試驗(yàn)系統(tǒng)。單細(xì)胞凝膠電泳(SCGE)試驗(yàn)檢測(cè)DNA損傷。微核試驗(yàn)(MNT)檢測(cè)細(xì)胞染色體損傷。2’，7’一二氫二氯熒光素(DCFH-DA)法測(cè)定細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)水平。免疫組化方法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)8-羥基脫氧鳥(niǎo)苷(8-OHdG)的表達(dá)情況。通過(guò)測(cè)定硫代巴比妥酸反應(yīng)物(TBARS)的方法來(lái)分析細(xì)胞的脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物水平。 結(jié)果：

4、 HepG2細(xì)胞與25-100μM的蘇丹紅1號(hào)接觸1h后，引起DNA鏈斷裂，細(xì)胞形成彗星樣拖尾，其尾長(zhǎng)明顯增長(zhǎng)，且呈劑量依賴關(guān)系。HepG2細(xì)胞與25-100μM的蘇丹紅1號(hào)接觸24h后可致細(xì)胞微核明顯增加，并隨蘇丹紅Ⅰ號(hào)濃度的增高而增加。25-100μM的蘇丹紅Ⅰ號(hào)作用于HepG2細(xì)胞1h后，僅100μM的蘇丹紅Ⅰ號(hào)可引起細(xì)胞內(nèi)ROS水平增加：接觸3h后，僅50，100 μM的蘇丹紅Ⅰ號(hào)可致8-OHdG的表達(dá)升高；作用24 h后，僅5