黑果枸杞提取物抗氧化性研究及對(duì)HepG2細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用.pdf

1、黑果枸杞（Lycium ruthenicum Murr.）是我國(guó)西北特有的抗鹽抗旱野生植物種，黑果枸杞果實(shí)干燥后可以作為中藥材應(yīng)用于傳統(tǒng)中藥制劑中，同時(shí)也適用于泡茶、泡酒等日常食用方式，是傳統(tǒng)藥食兩用食物。近年來(lái)已有文獻(xiàn)報(bào)道黑果枸杞具有多種生理活性，包括抗疲勞、抗糖尿病和降血脂等，但對(duì)于黑果枸杞及其提取物的體外抗氧化活性的研究報(bào)道卻很少。本研究以青海黑果枸杞為材料，對(duì)黑果枸杞的營(yíng)養(yǎng)及活性成分進(jìn)行測(cè)定，研究黑果枸杞提取物的提取條件、穩(wěn)定性

2、和主要多酚類成分及對(duì)人肝癌細(xì)胞(HepG2)氧化損傷的保護(hù)作用及機(jī)制，并對(duì)黑果枸杞?jīng)_泡液的植物化學(xué)物成分和抗氧化性進(jìn)行測(cè)定。主要研究結(jié)果如下:
　　1.對(duì)黑果枸杞主要營(yíng)養(yǎng)和活性成分進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果表明:黑果枸杞蛋白質(zhì)和粗脂肪含量分別為10.35％、5.89％，干果水分含量為10.61％，F(xiàn)e、Zn和Mn含量分別為58.50、2.05和1.961 mg/100 g，重金屬含量低，污染小?；ㄉ蘸繛?39.27 mg/100 g，總酚

3、和總黃酮為45.05、56.54 mg/g，多糖含量為7.83％，抗壞血酸含量為9.90 mg/100 g。說(shuō)明柴達(dá)木野生黑果枸杞有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。
　　2.通過(guò)單因素試驗(yàn)確定確定黑果枸杞提取物條件為:體積分?jǐn)?shù)為50％的乙醇水溶液作為提取溶劑，提取時(shí)間2h。提取物對(duì)加熱和光照不穩(wěn)定，抗氧化活性隨著加熱溫度和光照強(qiáng)度的升高而降低。黑果枸杞花色苷降解符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)，80、100℃加熱條件下，花色苷半衰期分別為5.87 h和2.50h。

4、光照導(dǎo)致提取物花色苷含量逐漸降低，放置時(shí)間越長(zhǎng)，抗氧化能力降低的越多，降低順序?yàn)槭覂?nèi)自然光＞室外自然光＞室內(nèi)避光，避光保存的條件下，花色苷半衰期為69.59天。
　　3.對(duì)黑果枸杞提取物的抗氧化活性進(jìn)行評(píng)價(jià)，與紅枸杞提取物和抗壞血酸(Vc)進(jìn)行對(duì)比。其中，黑果枸杞提取物清除羥自由基和總抗氧化能力均高于相同濃度的Vc和紅枸杞提取物，清除DPPH自由基能力低于Vc。HPLC-MS分析提取物多酚類成分結(jié)果顯示，提取物中含矢車菊-3-O-

5、葡萄糖苷和飛燕草素-3-O-葡萄糖苷等。
　　4.黑果枸杞提取物對(duì)HepG2細(xì)胞氧化損傷具有保護(hù)作用。建立HepG2細(xì)胞損傷模型的條件為:500μM H2O2，處理時(shí)間2h。MTT法檢測(cè)模型存活率為58.17％，用含250、500、1000μg/mL黑果枸杞提取物的培養(yǎng)液預(yù)保護(hù)24 h，能夠?qū)⒋婊盥史謩e提高至70.49％，73.35％和75.54％，并能提高細(xì)胞SOD酶水平，顯著降低細(xì)胞培養(yǎng)液上清LDH和MDA水平。同時(shí)流式細(xì)胞儀

6、檢測(cè)結(jié)果顯示，提取物能夠使氧化損傷細(xì)胞G0/G1期顯著增多，早期凋亡率從25.52％降至8.92～14.13％之間。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明黑果枸杞提取物可通過(guò)提高SOD酶水平，保護(hù)細(xì)胞膜的完整性來(lái)實(shí)現(xiàn)抗H2O2的氧化應(yīng)激反應(yīng)。
　　5.黑果枸杞干果用100℃水，沖泡90 min效果最佳，該條件下沖泡液花色苷、總酚、總黃酮和總糖含量分別為3.23、102、17.98、33.95 mg/100 mL，清除DPPH自由基能力為48.93％，F(xiàn)RA