構(gòu)建新型電化學(xué)生物傳感器并應(yīng)用于細(xì)菌相關(guān)靶標(biāo)檢測(cè).pdf

1、論文題目：構(gòu)建塹型電絲堂生物佳盛墨羞應(yīng)旦王細(xì)菌擔(dān)羞塑拯撿塑4答辯委員會(huì)主席：黃佳立麴握答辯委員會(huì)成員：渣菱趁盟宜旦黃連出重I嬰宜旦溫州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文構(gòu)建新型電化學(xué)生物傳感器并應(yīng)用于細(xì)菌相關(guān)靶標(biāo)檢測(cè)摘要目的(1)利用四面體DNA納米結(jié)構(gòu)電化學(xué)基因傳感器對(duì)多種細(xì)菌進(jìn)行快速靈敏的通用及特異性檢測(cè)。(2)構(gòu)造一種新的光學(xué)和電化學(xué)方法，檢測(cè)生物小分子ATP。方法(1)提取細(xì)菌RNA，使用具有特異性或通用性的引物對(duì)cDNA進(jìn)行擴(kuò)增，構(gòu)造四面體

2、DNA電化學(xué)基因傳感器，利用特異性或通用探針對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)。(2)在葡萄糖氧化酶法葡萄糖檢測(cè)體系中，加入以三磷酸腺苷和葡萄糖為底物的己糖激酶與葡萄糖氧化酶競(jìng)爭(zhēng)消耗葡萄糖，葡萄糖信號(hào)的變化間接反映了溶液中ATP的含量。通過(guò)光學(xué)法和電化學(xué)方法對(duì)ATP進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果(1)基于16SrRNA的細(xì)菌檢測(cè)實(shí)驗(yàn)：首先，我們以Ecoli為模型，對(duì)四面體DNA電化學(xué)基因傳感器的檢測(cè)靈敏度進(jìn)行了考察，結(jié)果表明，對(duì)合成DNA的檢測(cè)限可以達(dá)到100aM，對(duì)

3、不對(duì)稱(chēng)PCR產(chǎn)物的檢測(cè)限為10fM。隨后，我們對(duì)9種細(xì)菌特異性擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳表征，結(jié)果表明，9種引物都能對(duì)其對(duì)應(yīng)菌種實(shí)現(xiàn)擴(kuò)增，而且對(duì)部分細(xì)菌達(dá)到了1CFU的檢測(cè)水平；對(duì)9種細(xì)菌通用擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳表征，結(jié)果顯示，9種細(xì)菌均有明顯擴(kuò)增產(chǎn)物。再者，我們考察了引物特異性，發(fā)現(xiàn)，在現(xiàn)有PCR條件下6種引物特異性不理想。最后，我們考察了四面體DNA電化學(xué)基因傳感器對(duì)除Ecoli外的其余8種細(xì)菌的合成DNA的檢測(cè)靈敏度