pTAC14甲基化酶功能對(duì)擬南芥葉綠體發(fā)育影響的研究.pdf

1、pTAC14是葉綠體編碼的RNA聚合酶復(fù)合物必需組分之一，ptac14T-DNA插入突變體表現(xiàn)為幼苗白化致死，pTAC14同pTAC12相互作用一起調(diào)控葉綠體基因的表達(dá)。但是，其生物功能尚不清楚。本論文研究了pTAC14的功能。pTAC14具有SET和Rubis-binding兩個(gè)結(jié)構(gòu)域。生物信息學(xué)分析表明pTAC14具有典型的SET蛋白質(zhì)賴氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶所共有的若干氨基酸保守基序。定點(diǎn)誘變和轉(zhuǎn)基因互補(bǔ)分析發(fā)現(xiàn)，G103、N286、Y3

2、24氨基酸殘基對(duì)維持pTAC14的功能是必需的。體外的Pulldown實(shí)驗(yàn)表明，pTAC14能結(jié)合Rubisco大亞基，即rbcL。體外甲基化孵育實(shí)驗(yàn)和Westernblot檢測(cè)實(shí)驗(yàn)表明，rbcL能夠被pTAC14甲基化。這些結(jié)果表明，pTAC14能夠作為甲基轉(zhuǎn)移酶對(duì)rbcL進(jìn)行甲基化。另外，本論文也分析了PEP復(fù)合物中必需組分缺失的突變體中的核心亞基rpoA和PEP成員pTAC12的積累情況，結(jié)果表明，ptac7、ptac10、pta

3、c14、trxZ和atpG白化突變體中核心亞基rpoA的積累量呈現(xiàn)相同下降趨勢(shì)，和1/4野生型中rpoA的量差不多。ptac7和trxZ突變體中pTAC12的積累量相同，都表現(xiàn)為嚴(yán)重下降，ptac10和atpG背景下pTAC12的積累量同1/4野生型中pTAC12表達(dá)量相同，ptac14背景下pTAC12的積累量略微下降。我們根據(jù)pTAC14蛋白結(jié)構(gòu)特征分成六段分別構(gòu)建上pGBKT7載體，通過(guò)酵母雙雜實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)這六段均不和pTAC12存在