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文檔簡介
1、在植物的生長發(fā)育和組織分化過程中,DNA甲基化在基因表達(dá)調(diào)控方面發(fā)揮重要作用。本實驗以模式植物擬南芥(Arabidopsis thaliana)為材料,對四種藥品(土霉素,二甲基亞砜,甘露醇,姜黃素)不同濃度處理對擬南芥生長發(fā)育和生理生化反應(yīng)的影響,以及植物基因組DNA的甲基化水平和變化模式進(jìn)行了研究。所取得的主要結(jié)果如下:
(1)對不同土霉素濃度下擬南芥幼苗生長發(fā)育及基因組DNA的甲基化水平和變化模式進(jìn)行了研究。結(jié)果表明
2、,3、5、7和9 μmol·L-1土霉素脅迫對擬南芥幼苗的根長和株高有顯著抑制作用;但對擬南芥幼苗的側(cè)根數(shù)量有顯著促進(jìn)作用。甲基化敏感擴增多態(tài)性(methylation-sensitive amplification polymorphism,MSAP)分析表明,經(jīng)3、5、7和9 μmol·L-1土霉素處理后基因組DNA甲基化比率分別為17.91%、12.50%、11.81%和14.62%,均低于對照(18.18%)。結(jié)果表明,擬南芥經(jīng)
3、土霉素脅迫后存在基于 DNA甲基化水平和模式改變的表觀遺傳變異,5-甲基胞嘧啶百分含量的變化無統(tǒng)一趨勢或規(guī)律。與對照相比,3、5、7和9 μmol·L-1土霉素脅迫下擬南芥幼苗基因組DNA的甲基化和去甲基化分別為13.29%、9.22%、8.03%、12.59%和2.80%、4.26%、5.11%、4.90%。
(2)對不同濃度二甲基亞砜(DMSO)處理下擬南芥生長發(fā)育及基因組DNA的甲基化水平和變化模式進(jìn)行了分析。結(jié)果表
4、明,130、260、400和500 μmol·L-1 DMSO處理影響擬南芥苗的根長、株高和開花時間;甲基化敏感擴增多態(tài)性(methylation-sensitive amplification polymorphism,MSAP)分析表明,經(jīng)130、260、400和500 μmol·L-1 DMSO處理后基因組DNA甲基化比率分別為24.26%、14.36%、16.58%和13.02%,對照為 22.5%。即擬南芥經(jīng)DMSO處理后存在
5、基于 DNA甲基化水平和模式改變的表觀遺傳變異。與對照相比,130、260、400和500 μmol·L-1 DMSO處理下擬南芥幼苗基因組DNA的甲基化和去甲基化比率分別為7.21%、6.03%、11.62%、10.2%和6.25%、10.05%、8.08%、8.67%。
(3)不同濃度甘露醇處理下擬南芥生長發(fā)育及基因組DNA的甲基化水平和變化模式的研究結(jié)果表明,50、100、150和 200 mmol·L-1甘露醇處理
6、影響擬南芥幼苗的形態(tài)特征和生長態(tài)勢;甲基化敏感擴增多態(tài)性(methylation-sensitive amplification polymorphism,MSAP)分析表明,經(jīng)50、100、150和 200 mmol·L-1 甘露醇處理后基因組DNA甲基化比率分別為 17.75%、21.15%、15.49%和 46.10%。經(jīng)甘露醇處理后存在基于DNA甲基化水平和模式改變的表觀遺傳變異。與對照相比,50、100、150和 200 mm
7、ol·L-1甘露醇處理下擬南芥幼苗基因組DNA的甲基化和去甲基化比率分別為 5.78%、15.48%、10.71%、33.73%和 10.98%、5.36%、8.33%、7.69%。
(4)不同濃度姜黃素處理下擬南芥幼苗的生長發(fā)育及基因組DNA的甲基化水平和變化模式的研究結(jié)果表明,5、10、15、20、30、40和50 μmol·L-1姜黃素處理下影響擬南芥幼苗的生長態(tài)勢,對擬南芥幼苗的根長有顯著抑制作用;不同濃度姜黃素處
8、理影響了擬南芥的正常生理生化反應(yīng),導(dǎo)致擬南芥的葉片失綠,MDA和Pro含量積累,膜透性增強。甲基化敏感擴增多態(tài)性(methylation-sensitive amplification polymorphism,MSAP)技術(shù)實驗分析擬南芥T0,T1和 T2株系的DNA胞嘧啶甲基化水平和檢測特定位點的甲基化模式,結(jié)果表明T0代植物的MSAP比率和全甲基化水平要低于T1和 T2 代自交系。在T0代植物中,姜黃素處理20天擬南芥幼苗的DNA
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