利用自組裝技術(shù)在鈦表面定向固定CD34抗體及其內(nèi)皮化誘導(dǎo)研究.pdf

1、材料表面導(dǎo)致的凝血問題是與血液接觸材料的關(guān)鍵科學(xué)問題。在人工心血管植入物表面形成類似天然血管內(nèi)膜，即植入物的內(nèi)皮化被認(rèn)為是最終解決植入后血栓形成問題和提高遠(yuǎn)期通暢率的根本途徑。本論文利用自組裝技術(shù)在鈦表面定向固定CD34抗體，以實(shí)現(xiàn)材料內(nèi)皮生物化修飾，并對自組裝生物修飾層進(jìn)行表征和功能評價(jià)。
　　 鈦經(jīng)堿活化后，表面產(chǎn)生帶負(fù)電荷的羥基，自組裝一層帶正電荷的親和素，通過親和素-生物素特異結(jié)合組裝一層生物素化A蛋白，牛血清白蛋白(B

2、SA)封閉非特異性位點(diǎn)，通過A蛋白結(jié)合CD34抗體的Fc端實(shí)現(xiàn)定向固定CD34抗體，并暴露出CD34抗體的Fab端。傅立葉紅外漫反射(FTIR)和免疫熒光結(jié)果顯示親和素、生物素化A蛋白和CD34抗體成功組裝到材料表面；接觸角結(jié)果表明自組裝生物修飾層材料表面的親水性得到改善；掃描電子顯微鏡(SEM)和原子力顯微鏡(AFM)結(jié)果表明自組裝生物修飾層材料表面較均勻平滑，組裝后表面粗糙度Ra降低到55.84nm，這個(gè)尺度的粗糙度有利于內(nèi)皮祖細(xì)胞

3、(EPC)的粘附生長；石英晶體微天平(QCM)檢測出封閉自組裝過程定向固定CD34抗體量為192ng/cm2。
　　 內(nèi)皮祖細(xì)胞體外靜態(tài)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，自組裝生物修飾層鈦表面有利于捕獲內(nèi)皮祖細(xì)胞，并對內(nèi)皮祖細(xì)胞的粘附、生長與增殖有良好的促進(jìn)作用。內(nèi)皮祖細(xì)胞體外動(dòng)態(tài)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在流動(dòng)狀態(tài)下，自組裝生物修飾層鈦表面捕獲內(nèi)皮祖細(xì)胞的能力明顯優(yōu)于活化鈦，且有利于內(nèi)皮祖細(xì)胞的生長和增殖。
　　 2H動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，定向固定C

4、D34抗體材料表面能夠捕獲大量的內(nèi)皮細(xì)胞(EC)，只有少量血小板，并且血小板激活輕微，而活化鈦表面內(nèi)皮細(xì)胞很少，卻附著較多血小板，并且激活較嚴(yán)重。15D動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，定向固定CD34抗體的材料表面形成一層平滑的細(xì)胞層，但是活化鈦表面卻形成以平滑肌增生為主的組織。HE染色結(jié)果顯示，定向固定CD34抗體材料表面誘導(dǎo)的組織更接近天然的內(nèi)膜組織，其Ⅷ因子鑒定結(jié)果為陽性，說明其表面誘導(dǎo)的細(xì)胞是內(nèi)皮細(xì)胞，并具有血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能。