野油菜黃單胞菌HHL-3抗藥性質(zhì)粒轉(zhuǎn)化和產(chǎn)膠基因XanA基礎(chǔ)研究.pdf

1、本課題主要研究了野油菜黃單胞菌HHL-3的感受態(tài)細胞的制備、帶有抗藥性質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化、菌種基因組DNA提取方法的建立和酶切及產(chǎn)膠基因XanA片段的PCR擴增。提出了制備感受態(tài)細胞的標準方案，采用此方案獲得了轉(zhuǎn)化率為2×106-4×107cfu/ugDNA的野油菜黃單胞菌感受態(tài)細胞。用去污劑SDS和CTAB破壞細胞膜結(jié)構(gòu)，使胞內(nèi)核酸釋放，用酚/氯仿/異戊醇去除蛋白質(zhì)，異丙醇沉淀DNA，TE溶解DNA。采用此SDS和CTAB結(jié)合的方法提取的DN

2、A瓊脂糖電泳圖譜與試劑盒UNIQ-10提取的基因組DNA及D-5010A試劑盒法提取的基因組DNA圖譜相同，DNA經(jīng)紫外分光光度計檢測OD260/OD280在1.80-1.90之間。DNA能被EcoRI、XbalI酶切消化。根據(jù)從互聯(lián)網(wǎng)上的基因數(shù)據(jù)庫中查閱獲得XanA基因的核苷酸序列來設(shè)計相應(yīng)的引物，以黃原膠菌株基因組DNA為模板，通過對PCR條件的優(yōu)化實驗從而擴增得到XanA基因。進行野油菜黃單胞菌XanA產(chǎn)膠基因PCR擴增程序的優(yōu)化