枯草芽孢桿菌G8發(fā)酵條件的優(yōu)化、抗菌物質(zhì)的部分特性分析及分離純化.pdf

1、枯草芽孢桿菌G8對(duì)多種植物病原真菌具有拮抗作用，其抑菌機(jī)制是產(chǎn)生抗菌蛋白。本論文對(duì)G8的發(fā)酵培養(yǎng)基組分和發(fā)酵條件進(jìn)行了優(yōu)化，測定了抗菌蛋白的部分理化性質(zhì)并對(duì)其進(jìn)行了分離純化，為研究抗菌蛋白的性質(zhì)和結(jié)構(gòu)、防病機(jī)理及菌株的遺傳改良奠定基礎(chǔ)。 1、為提高枯草芽孢桿菌G8抗菌蛋白的產(chǎn)量，采用單因素和正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，通過搖瓶培養(yǎng)對(duì)枯草芽孢桿菌G8產(chǎn)生抑菌活性物質(zhì)的發(fā)酵培養(yǎng)基和發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果表明，優(yōu)化培養(yǎng)基配方(g/L)為：玉米淀粉5

2、g、大豆蛋白胨5g、NH4Ac20g、CaCO30.5g；最適接種體培養(yǎng)時(shí)間12h；適宜發(fā)酵條件為：初始pH7、溫度35℃、接種量3％、裝液量70～100mL/250mL、轉(zhuǎn)速180r/min、最佳培養(yǎng)時(shí)間48h。在上述優(yōu)化條件下獲得發(fā)酵液活性是LB培養(yǎng)基的2.1倍，硫酸銨沉淀后蛋白質(zhì)濃度達(dá)103.9mg/L，為LB培養(yǎng)基的2.3倍。 2、為明確枯草芽孢桿菌G8抗菌蛋白的理化性質(zhì)，研究了溫度、pH、金屬離子、表面活性劑和蛋白酶對(duì)

3、其穩(wěn)定性的影響，并使用特殊培養(yǎng)基測定了其分解特定底物的能力。結(jié)果表明，該抗菌蛋白具有較強(qiáng)的熱穩(wěn)定性，100℃處理1h后基本保持完全的活性，121℃高壓處理30min后，仍能保持90％以上的活性；對(duì)酸較穩(wěn)定，可忍受pH為2的酸度：對(duì)金屬離子不敏感；和表面活性劑可發(fā)生相互作用；對(duì)胰蛋白酶和胃蛋白酶有一定耐受力，對(duì)蛋白酶K較敏感。底物特異性試驗(yàn)表明活性蛋白不是幾丁質(zhì)酶、羧甲基纖維素酶和β-1，3-葡聚糖酶。 3、硫酸銨沉淀的樣品經(jīng)Se

4、phadexG-100凝膠層析、CelluloseDE-52陰離子交換層析、CMSepharoseCL-6B陽離子交換層析、Pheny-Sepharose6FF疏水層析，結(jié)合SDS-PAGE、Tricine-SDS-PAGE和活性測定，推測該活性物質(zhì)為分子量約4000Da的肽類。鹽酸沉淀、甲醇抽提后的樣品經(jīng)TLC、IR分析表明可能是一線形脂肽類物質(zhì)。 4、評(píng)價(jià)了枯草芽孢桿菌G8抗菌蛋白對(duì)黃瓜菌核病菌的抑制效果。采用菌絲生長速率法