抗稻瘟病的海洋枯草芽孢桿菌的分離鑒定與抗菌物質(zhì)初探.pdf

1、分類(lèi)號(hào)：密級(jí)：學(xué)校代碼：學(xué)號(hào)：遣享師花大擎10165201111163碩士學(xué)位論文抗稻瘟病的海洋枯草芽孢桿菌的分離鑒定與抗菌物質(zhì)初探作者姓名：學(xué)科、專(zhuān)業(yè)：研究方向：導(dǎo)師姓名：劉淼海洋生物學(xué)2014年06月遼寧師范大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要稻瘟病是水稻最主要三大病害之一，危害世界各地。傳統(tǒng)防治稻瘟病的方法有化學(xué)農(nóng)藥防治和抗病品種的選育。但是由于化學(xué)農(nóng)藥的濫用造成嚴(yán)重的環(huán)境污染，并且可以在動(dòng)植物體內(nèi)累積，對(duì)人畜等造成危害。而抗病品種的單一性造成其

2、不能夠很好的防治水稻稻瘟病。目前，隨著生物農(nóng)藥的開(kāi)發(fā)和應(yīng)用以及陸生資源的有限，更多的人選擇從海洋中篩選能夠防止植物病害的微生物資源，用來(lái)開(kāi)發(fā)新型的生物農(nóng)藥。本實(shí)驗(yàn)從遼寧大連灣地區(qū)采集樣品，通過(guò)牛津杯法平板對(duì)峙法篩選得到221株菌。其中，細(xì)菌179株，真菌24株，放線(xiàn)菌18株。以稻瘟病菌為指示菌株，通過(guò)平板對(duì)峙法進(jìn)行初篩和復(fù)篩，獲得5株具有抑制作用的菌株，其中一株抑制稻瘟病效果很好，通過(guò)形態(tài)學(xué)觀(guān)察、生理生化鑒定和16srDNA鑒定為一株海

3、洋枯草芽孢桿菌，命名為DL006。通過(guò)對(duì)篩選的DL006進(jìn)行碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽等單因素及發(fā)酵時(shí)間、發(fā)酵溫度、培養(yǎng)基初始pH值、搖床轉(zhuǎn)速及接種量等條件進(jìn)行發(fā)酵優(yōu)化。結(jié)果得出在本實(shí)驗(yàn)中其培養(yǎng)基最佳碳源是蔗糖，最佳氮源是胰蛋白胨，最佳無(wú)機(jī)鹽選擇是NaCl。發(fā)酵優(yōu)化的單因素實(shí)驗(yàn)得出，發(fā)酵時(shí)間為72小時(shí)、發(fā)酵溫度為30℃、培養(yǎng)基初始pH為7、接種量為8％、搖床轉(zhuǎn)速為180rpm。最后通過(guò)對(duì)煙草黑脛病菌(Phytophthoranicotianae

4、)、玉米大斑病菌(Exerohilumturcicum)、禾谷病菌(FusariumgraminearumSchw)和水稻白葉枯病菌(Xanthomonasoryzae)多種植物病原菌及人病原真菌白念球菌(Candidiaalbicans)的抑菌測(cè)試結(jié)果得出DL006能夠廣譜抗病原菌。應(yīng)用光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡對(duì)DL006抑制稻瘟病菌進(jìn)行顯微觀(guān)察。結(jié)果顯示未抑制的稻瘟病菌菌絲生長(zhǎng)粗細(xì)均勻，沒(méi)有突出，受到抑制后菌絲突出膨大，嚴(yán)重畸形。這一

5、結(jié)果展示出DL一006對(duì)水稻稻瘟病的抑菌機(jī)制。目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)從海洋中篩選抗水稻稻瘟病的微生物研究尚淺，很多方法并不十分成熟，本文采用常規(guī)硫酸銨分級(jí)鹽析和等電點(diǎn)沉淀法，獲得具有抑菌活性的蛋白類(lèi)物質(zhì)，說(shuō)明菌株DL006能夠產(chǎn)生具有抑菌作用的胞外蛋白類(lèi)活性物質(zhì)，根據(jù)這一結(jié)論對(duì)DL006發(fā)酵上清液真空冷凍干燥后進(jìn)行TricineSDSPAGE和質(zhì)譜分析，結(jié)果可以看出其發(fā)酵液里含有多種蛋白酶類(lèi)物質(zhì)。對(duì)具有抑菌活性蛋白的提取與鑒定則需要進(jìn)一步研究。