Kefir粒超微結構、kefir發(fā)酵特性及PCR-SSCP系統(tǒng)的建立.pdf

1、開菲爾(kefir)是一種起源于東歐的發(fā)酵乳飲料，其以牛奶等為原料、開菲爾粒為發(fā)酵劑發(fā)酵而成。本文主要以開菲爾和開菲爾粒為研究對象，用掃描電鏡觀察了開菲爾粒的超微結構，跟蹤了開菲爾乳整個發(fā)酵過程中pH、酸度、微生物數(shù)以及乳糖利用的變化情況，然后用傳統(tǒng)方法分離鑒定了開菲爾乳中酵母菌和乳酸菌，最后利用PCR-SSCP技術，評價了三種DNA提取方法對開菲爾乳中微生物多樣性檢測的影響，以找到最佳提取方法。
　　用掃描電鏡觀察開菲爾粒，其表

2、面棲息著大量的乳桿菌、乳球菌及酵母菌等，而基質中存在的菌種和菌數(shù)均較少，且大多數(shù)菌體不具備完整的細胞形態(tài)，因此開菲爾粒表面的微生物對牛奶的發(fā)酵更具意義。
　　以開菲爾粒為發(fā)酵劑發(fā)酵牛奶，跟蹤發(fā)酵過程中pH、酸度、微生物數(shù)的變化及乳糖利用情況，結果表明經(jīng)開菲爾粒發(fā)酵后牛乳的pH值降幅很大，發(fā)酵24h后pH值從6.798降到4.102，酸度則從16.1°T上升到96.9°T。在發(fā)酵初始階段開菲爾乳中乳球菌為優(yōu)勢菌，乳桿菌次之;到發(fā)酵結

3、束時，乳桿菌為優(yōu)勢菌，乳球菌次之，乳球菌、乳桿菌和酵母菌分別達到1.6×107 cfu/mL、7.7×107 cfu/mL、1.1×105 cfu/mL。開菲爾發(fā)酵也導致了發(fā)酵乳中乳糖含量的顯著降低，發(fā)酵終點時開菲爾乳中乳糖含量從4.05mg/mL降為1.90mg/mL。
　　用傳統(tǒng)的分離鑒定方法，從開菲爾乳中分離得到兩株酵母菌菌株和—株乳酸菌菌株，分別命名為Y1、Y2和R1。對這三株菌進行形態(tài)學觀察及生理生化鑒定，將酵母菌Y1菌

4、株鑒定為克魯維酵母(Kluyveromyces sp.)，Y2菌株鑒定為假絲酵母(Candida sp.)，乳酸菌R2鑒定為乳酸乳球菌乳酸亞種（L，lactis subsp.lactis）。
　　為了建立用于開菲爾乳微生物多樣性PCR-SSCP研究的微生物總DNA提取的可靠方法，為開菲爾乳微生物分子生態(tài)學研究提供參考，本文以PCR-SSCP技術為基礎，評價了溶菌酶法、CTAB法和超聲波法對開菲爾發(fā)酵乳微生物多樣性檢測的影響。結果表