溫莪術內生真菌誘變株M7226的發(fā)酵及其代謝產物的分離純化.pdf

1、目的:
　　以溫莪術活性內生真菌EZG0807經超導磁體模擬重力環(huán)境誘變后的菌株M7226為研究對象，通過響應面優(yōu)化法對其發(fā)酵條件（發(fā)酵溫度、初始pH值和發(fā)酵時間）進行優(yōu)化，更大程度發(fā)揮其積累代謝產物的潛力;并在最佳發(fā)酵條件下，對菌株M7226進行大量搖瓶發(fā)酵，通過對發(fā)酵液性質的初步研究，選擇合適的分離純化方法，從而分離純化出具有生物活性的單體化合物。
　　方法:
　　采用響應面分析法中的Box-BehnkenDesi

2、gn(BBD)設計實驗方案，確定影響因素和因素水平從而獲得最佳發(fā)酵條件，然后在此條件下進行大量發(fā)酵;為了方便后續(xù)分離純化，我們先進行了發(fā)酵液的pH和溫度穩(wěn)定性實驗研究;采用濾紙片擴散法對發(fā)酵液的石油醚相、氯仿相和正丁醇相進行了抑菌活性研究，并利用顯色試驗推測物質的大概類型。最后采用硅膠、SephadexLH20、大孔樹脂和ODS等柱層析分離方法對菌株M7226的代謝產物進行分離純化，并通過UV、IR、MS、1H和13CNMR等波譜對分離

3、得到的化合物進行結構鑒定。
　　結果:
　　1.經過響應面優(yōu)化法BBD試驗，確定菌株M7226的最佳發(fā)酵條件是發(fā)酵溫度29℃，初始pH值6.8，發(fā)酵時間10d;
　　2.pH和溫度穩(wěn)定性實驗結果顯示菌株M7226發(fā)酵液對溫度不敏感，但對酸性條件比較敏感;抑菌實驗顯示發(fā)酵液的氯仿相和正丁醇相對四種指示細菌有抑制效果，石油醚相沒有活性;
　　3.菌株M7226的代謝產物經硅膠、SephadexLH20、大孔樹脂和OD