基于適體引發(fā)的DNA循環(huán)放大生物傳感方法的研究.pdf

1、本論文基于核酸適體與目標(biāo)配體之間具有高度的親和力和特異性識(shí)別能力，建立了基于引物自產(chǎn)生的適體DNA引發(fā)的循環(huán)放大方法、發(fā)卡DNA聚合酶鏈剪切循環(huán)放大方法，基于DNA分子機(jī)器和滾環(huán)復(fù)制的循環(huán)放大等新型的循環(huán)放大方法。采用了電致化學(xué)發(fā)光和表面增強(qiáng)拉曼散射方法，制備了具有SERS活性的納米金生物條碼探針，構(gòu)建了實(shí)現(xiàn)了生物活性小分子、蛋白質(zhì)、基因和腫瘤細(xì)胞的高靈敏度、高選擇性檢測(cè)。主要內(nèi)容包括以下幾個(gè)方面:
　　1.利用適體的結(jié)構(gòu)互變性質(zhì)

2、，構(gòu)建了一種基于PS-SDP反應(yīng)測(cè)定ATP的電致化學(xué)發(fā)光檢測(cè)方法。該方法以適體和引發(fā)鏈的互補(bǔ)形成的配合物作為媒介，通過(guò)靶結(jié)合后引發(fā)的PS-SDP反應(yīng)和DNA多重循環(huán)放大反應(yīng)，實(shí)現(xiàn)了ATP的靈敏檢測(cè)。ATP的檢測(cè)限達(dá)3.1nmol/L。此方法具有靈敏度高、選擇性好、檢測(cè)方法簡(jiǎn)便快捷等優(yōu)點(diǎn)。本工作具有廣泛適用性，只需改變DNA適體的序列，即可實(shí)現(xiàn)基因、蛋白質(zhì)以及細(xì)胞等腫瘤標(biāo)志物的高靈敏度和高選擇性檢測(cè)，為電致化學(xué)發(fā)光生物傳感分析方法供了新的

3、思路和途徑。
　　2.采用表面增強(qiáng)拉曼散射技術(shù)，基于適體與目標(biāo)分子的特異性結(jié)合性質(zhì)，我們提出了一種新型的發(fā)卡DNA聚合酶鏈剪切循環(huán)放大檢測(cè)溶菌酶的方法。以納米金為增強(qiáng)底物，制備了攜帶有大量拉曼分子的納米金生物條碼作為拉曼信號(hào)探針。該體系中利用浴菌酶適體作為系統(tǒng)中的目標(biāo)分子識(shí)別元件，在聚合酶，剪切酶以及dNTPs的存在下，引發(fā)了發(fā)卡DNA的指數(shù)式擴(kuò)增循環(huán)，使信號(hào)顯著增強(qiáng)，并通過(guò)磁性分離和洗滌，除去過(guò)量的納米金生物條碼，降低了檢測(cè)體系

4、的背景值，從而實(shí)現(xiàn)了溶菌酶的高靈敏度檢測(cè)，檢測(cè)限達(dá)5.0×10-15mol/L。
　　3.構(gòu)建了一種新型的DNA分子機(jī)器，并將表面增強(qiáng)拉曼光譜技術(shù)引入DNA分子機(jī)器循環(huán)中。以?xún)?nèi)切酶為介導(dǎo)，目標(biāo)DNA引發(fā)了DNA循環(huán)放大反應(yīng)和滾環(huán)復(fù)制放大反應(yīng)(RCA)，使信號(hào)顯著增強(qiáng)，并通過(guò)磁性分離和洗滌，除去過(guò)量的納米金生物條碼，降低了檢測(cè)體系的背景值，從而實(shí)現(xiàn)了目標(biāo)DNA的高靈敏度檢測(cè)?；谶m體DNA對(duì)配體的高特異性識(shí)別和結(jié)合能力，迸一步通過(guò)檢