基于DNA循環(huán)放大的腫瘤標志物傳感分析研究.pdf

1、基于DNA循環(huán)放大的腫瘤標志物傳感分析研究學位論文完成日期：指導教師簽字：2012年6月8日—萬r答辯委員會成員簽字：趔3鑫31裂基于DNA循環(huán)放大的腫瘤標志物傳感分析研究摘要本論文的豐要內容是將電化學分析技術、比色分析技術、化學發(fā)光分析技術、納米技術、DNA雜交技術以及DNA循環(huán)放大技術相結合，研制出高靈敏度、高選擇性的新型DNA生物傳感器，對部分腫瘤標志物進行選擇性的識別和測定，為腫瘤的臨床早期診斷提供基礎性研究資利二本文著重描述了

2、三種類型(I自DNA牛物傳感器的研制以及其性質的研究：l研究了一種新穎且靈敏的1辱DNA栩判和內切酶循環(huán)放大用于檢測日標DNA自J電化學生物傳感器。：【作原理如下：首先，為DNA傳感器組裝過程，將DNA骨架連接在磁珠上，這樣就擴大了量子點修飾的DNA掰]’著位點。其次，為內切酶的循環(huán)放大過程，構建的DNA生物傳感器經過內切酶的循環(huán)放大過程，進一步提高JDNAJ芋歹0的檢測靈敏度。最后，為電化學檢測過程，加)kPbS量子點參與反應，經硝酸

3、處理過以后，Pb”的濃度變化可通過溶出伏安電流強度的變化來確定，由于目標DNA的濃度與Pb2的濃度在一定范圍內成正比關系，從而實現(xiàn)刑目標DNAfJq檢測。在實驗優(yōu)化級選定的最佳條件下，得到了目標DNA自4J線性范圍為2010。o～1010?！痬ol／L，檢洲限為1210“oM。2在結合磁珠和酶循環(huán)放大的前期工作基礎上，我們又研究r一種結合聚合酶循環(huán)放大、熵驅動過程和適體識別手段WJATP牛物傳感器。它用了比色檢測手段對Ramos癌細胞中

4、[￥JATP含量進行了檢測。傳感器工作原理如下：首先，構建熵驅動循環(huán)前體物。其次，加入燃料DNA、ATP適體DNA及聚合酶，構成了一個含有多個循環(huán)的反應體系。最后，加入標記了親和素的辣根過氧化物酶(HRP)，它跟含有生物素的燃料DNA結合，經磁珠分離后，HRPp司催化OPDA—H202顯色，形成的OPDA—H202一Avidin—HRP體系，產生的信號用紫外分光：此度計檢測。因為所測ATP的含量EEAvidin—HRP含量，即，OPDA

5、—H202顯色程度有關，并在一定范圍內成一定比例關系，所以可用于檢測ATP含量。在最佳實驗條件下，對ATP進行了測定，檢N5EN6110。oM。并且在此基礎上，實現(xiàn)了癌細胞中ATP含量的檢測。3在以上兩種生物傳感器的研究基礎上，我們結合最新的文獻報道探索了一種檢測細胞的新方法，與前兩種不同的是，這種新的檢測方法的研究目的不再局限于DNA或生物大分子的識別和檢測，它的主要用途是檢測癌細胞。其檢測原理是：首先，將底物DNA、Ramos癌細胞