基于表面增強(qiáng)拉曼技術(shù)的DNA循環(huán)放大生物傳感方法的研究.pdf

1、本文主要做了以下幾個(gè)方面的工作:一是基于表面增強(qiáng)拉曼光譜(surface enhanced Raman scattering spectrum，SERS)檢測(cè)技術(shù)構(gòu)建了一種新型的DNA循環(huán)放大方法，利用DNA酶和目標(biāo)分子結(jié)合后獨(dú)特的共反應(yīng)催化剪切活性，實(shí)現(xiàn)了高靈敏度檢測(cè)小分子物質(zhì)L-組氨酸的方法。二是將納米金粒子上分別修飾Rox分子和Cy3分子，制備了具有SERS活性的兩種不同的納米金生物條碼，基于表面增強(qiáng)拉曼散射分析方法，結(jié)合靶DNA

2、引發(fā)的鏈替代循環(huán)反應(yīng)，實(shí)現(xiàn)了兩種目標(biāo)DNA的同時(shí)檢測(cè)。在此基礎(chǔ)上，引入雙功能適體探針，實(shí)現(xiàn)了ATP和L-組氨酸的同時(shí)檢測(cè)。具體介紹如下:
　　1.利用DNA酶替代了傳統(tǒng)檢測(cè)方法中的目標(biāo)分子識(shí)別適體，基于DNA酶與目標(biāo)分子結(jié)合而引發(fā)的共反應(yīng)催化剪切活性釋放引發(fā)鏈，進(jìn)而激發(fā)鏈替代循環(huán)反應(yīng)，結(jié)合發(fā)卡探針引發(fā)的循環(huán)放大方法，實(shí)現(xiàn)了小分子物質(zhì)L-組氨酸的高靈敏度檢測(cè)，檢測(cè)限達(dá)0.74nM(3σ)。利用引發(fā)鏈的再循環(huán)利用，固定在磁珠上的發(fā)卡探

3、針被不斷的打開，進(jìn)而大量的生物條碼被固定到了磁珠上，實(shí)現(xiàn)了高效的源頭信號(hào)放大，并通過(guò)磁性分離和洗滌，除去過(guò)量的納米金生物條碼，降低了檢測(cè)體系的背景值，從而實(shí)現(xiàn)了L-組氨酸的高靈敏度檢測(cè)，可用于實(shí)際樣品細(xì)胞勻漿中的L-組氨酸的測(cè)定。該方法設(shè)計(jì)較為簡(jiǎn)單，操作快捷方便，更有廣泛的適用性和良好的選擇性。
　　2.利用表面增強(qiáng)拉曼散射技術(shù)高分辨率的特性，基于DNA鏈之間的堿基互補(bǔ)原理，并結(jié)合兩種不同的納米金生物條碼，首次創(chuàng)建了一種新型的電化

4、學(xué)檢測(cè)方法，實(shí)現(xiàn)了兩種目標(biāo)DNA的同時(shí)檢測(cè)。以納米金為增強(qiáng)底物，制備了分別由Rox分子、Cy3分子修飾的兩種不同的生物條碼探針。在目標(biāo)DNA存在下，發(fā)生引物鏈增長(zhǎng)-替代反應(yīng)，實(shí)現(xiàn)了源頭信號(hào)放大，使信號(hào)顯著增強(qiáng)，檢測(cè)靈敏度顯著提高。
　　3.構(gòu)建了一種新型的DNA雙功能適體鏈，同時(shí)包含ATP與L-組氨酸兩段功能適體，結(jié)合DNA循環(huán)放大反應(yīng)，提出了一種利用表面增強(qiáng)拉曼技術(shù)同時(shí)檢測(cè)ATP與L-組氨酸的方法。在金納米粒子上分別修飾上Rox