高溫海藻糖合酶產(chǎn)生菌的篩選及其酶學(xué)性質(zhì)的研究.pdf

1、海藻糖是由兩個葡萄糖分子通過半縮醛羥基縮合而成的非還原性雙糖，廣泛存在于自然界中。由于它具有對生物大分子和生物體組織非特異性的保護(hù)作用，從而在分子生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、食品工業(yè)、化妝品工業(yè)、農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域有著廣闊的應(yīng)用前景，但是海藻糖制取上的困難限制了它的廣泛應(yīng)用。本文立足于利用海藻糖合酶酶法合成海藻糖，研究內(nèi)容包括產(chǎn)高溫海藻糖合酶菌株的選育及其培養(yǎng)特性的研究、海藻糖定量分析方法的確定、菌體細(xì)胞酶釋放體系、海藻糖合酶酶學(xué)特性及酶催化反應(yīng)特性的研究。

2、 通過高溫誘導(dǎo)等手段從蒙古一處高溫?zé)崛泻Y選到一株產(chǎn)高溫海藻糖合酶活性較高的菌株SN02004-01，并對其通過其形態(tài)特征、培養(yǎng)特征、生理生化特征和16S rRNA序列，根據(jù)《伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊》進(jìn)行菌種分類鑒定。確定SN02004-01菌屬于芽孢桿菌屬，定名為Bacillus sp.SN02004-01(EF059895)。其最佳培養(yǎng)條件為：以麥芽糖1.0％為碳源，以蛋白胨0.5％、酵母膏0.25％、硝酸鈉0.075％為復(fù)合

3、氮源、硫酸鎂0.025％、氯化鈣0.01％、磷酸氫二鉀0.05％，接種9h種齡的種子接種量為6％，培養(yǎng)基初始pH 7.0，65℃發(fā)酵培養(yǎng)24小時(shí)。 比較了多種對Bacillus sp．SN02004-01菌細(xì)胞酶釋放處理的方法，確定細(xì)胞酶釋放處理最佳體系為：試劑：2％甲苯+0.2％EDTA，菌體濃度為0.05g/ml，溫度為35℃，轉(zhuǎn)速為150r／min，最佳破壁時(shí)間為3h。對上述條件下處理好的酶液的性質(zhì)進(jìn)行系統(tǒng)研究的結(jié)果為：在

4、底物麥芽糖濃度為10％、反應(yīng)液pH為7.0、反應(yīng)時(shí)間為20h條件下，酶的最適反應(yīng)溫度為60℃，在不高于70℃時(shí)穩(wěn)定：酶的最適反應(yīng)pH為pH7.0-7.5，pH穩(wěn)定范圍pH6.0-8.0。Fe<'3+>、K<'+>、Mg<'2+>對酶的酶活有一定的激活作用，Na<'+>對酶活的效果不明顯，而Cu<'2+>、zn<'2+>對該酶有很強(qiáng)的抑制作用，研究發(fā)現(xiàn)該酶的底物特異性很強(qiáng)，只能特異性地將麥芽糖轉(zhuǎn)化為海藻糖。通過對酶進(jìn)行硫酸銨鹽析、凝膠過濾