前列腺素D2對心房鈉尿肽分泌的影響及其機制研究.pdf

1、鈉尿肽家族(family of natriuretic peptides，NPs）是一類具有相似結(jié)構(gòu)及生物學(xué)活性的激素，其對機體的穩(wěn)態(tài)發(fā)揮重要作用，如排鈉利尿、調(diào)節(jié)機體水鹽平衡，通過與其它旁分泌激素的相互作用調(diào)節(jié)血壓，還參與調(diào)控細胞增殖和細胞分泌等細胞生理變化。迄今，在哺乳動物體內(nèi)共發(fā)現(xiàn)三種NPs物質(zhì)：心房鈉尿肽（atrial natriuretic peptide，ANP），腦鈉尿肽（brain natriuretic peptide

2、，BNP)和C型鈉尿肽（C-type natriuretic peptide，CNP）。人們在綠曼巴（Dendroaspis angusticeps）的毒液內(nèi)發(fā)現(xiàn)了第四種 NP，D型鈉尿肽（Dendroaspis-type natriuretic peptide，DNP），且與人類血漿有免疫反應(yīng)。
　　ANP是由心肌細胞合成和分泌的一種對心臟的功能起重要作用的激素，它廣泛分布于心臟血管系統(tǒng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)及腎臟組織中，與膜

3、結(jié)合鈉尿肽受體A或C（natriuretic peptide receptor A/C，NPRA，NPRC）結(jié)合而發(fā)揮生物學(xué)作用。ANP與NPRA受體結(jié)合，激活與其耦聯(lián)的鳥苷酸環(huán)化酶，致使細胞內(nèi)第二信使環(huán)磷酸鳥苷（guanosin3′,5′- cyclic monophosphate，cGMP）的生成，繼而激發(fā)細胞內(nèi)多個信號的轉(zhuǎn)導(dǎo)，調(diào)節(jié)細胞生理功能。NPRC是一種未與鳥苷酸環(huán)化酶耦聯(lián)的受體，其主要功能是介導(dǎo)清除體內(nèi)三種NPs。也有研究證

4、明，NPR-C也能通過百日咳毒素敏感型G蛋白傳導(dǎo)胞外信號。
　　調(diào)節(jié)ANP合成和分泌的因素有多種，概括如體液、物理及神經(jīng)等。心房肌細胞的物理牽張是誘發(fā)ANP分泌的關(guān)鍵因素。激素類物質(zhì)也參與調(diào)節(jié)ANP的分泌，如內(nèi)皮素（endotheline-1，ET-1）、血管緊張素、血管升壓素等。其中ET-1對牽張誘發(fā)ANP分泌的過程是一個不可或缺的因素。然而心房牽張、缺血以及ET-1最終都通過影響花生四烯酸代謝生成前列腺素來調(diào)節(jié)ANP分泌的。<

5、br>　　前列腺素（prostaglandins，PGs）是一類不飽和脂肪酸激素類，分布于人體及動物體的多種組織，對機體多種系統(tǒng)起重要的調(diào)節(jié)作用，尤其是對心血管活動的調(diào)節(jié)。哺乳動物的心肌細胞能合成PGs，如PGF2α、PGE2、PGI2和PGD2。研究報道，PGs對心血管疾病調(diào)節(jié)至關(guān)重要，其參與心肌肥大、心肌梗死及心肌纖維化的發(fā)病過程。起初PGD2被認為是一種生物活性較低的前列腺素，后有研究證明，PGD2對心血管的調(diào)節(jié)作用也是至關(guān)重要的

6、，其對缺血再灌注損傷有拮抗作用。早期研究表明，調(diào)節(jié)ANP的分泌過程涉及到多種PGs。但對于PGD2如何參與調(diào)節(jié)心房ANP分泌的機制缺乏實驗及理論支持。
　　本項研究以離體搏動的大鼠心房為灌流模型，探討 PGD2對大鼠心房 ANP分泌的影響及其機制，為闡明PGD2對心臟作用提供初步依據(jù)。
　　本實驗結(jié)果如下：
　　1.與對照循環(huán)相比，PGD2（1.0μmol/L）明顯增加ANP的分泌（P<0.001），且稱時間依賴性，同

7、時也促進心房搏動壓的上升（P<0.01）。
　　2. L-型Ca2+通道的阻斷劑nifedipine（1.0μmol/L）減弱了PGD2對心房ANP分泌的增加效應(yīng)（與PGD2循環(huán)比，P<0.001，與nifedipine循環(huán)比，P<0.05），但沒有改變PGD2促進心房搏動壓上升的作用（與nifedipine循環(huán)比，P<0.05）。
　　3. PKA阻斷劑H-89（1.0μmol/L）減弱了PGD2對心房ANP分泌的增加效應(yīng)

8、（與 PGD2循環(huán)比，P<0.001，與 H89循環(huán)比，P<0.05），但沒有改變 PGD2促進心房搏動壓上升的效應(yīng)（與H89循環(huán)比，P<0.05）。
　　4.蛋白激酶非選擇性抑制劑staurosporine（0.3μmol/L）減弱了PGD2對心房ANP分泌的增加效應(yīng)（與PGD2循環(huán)比，P<0.001，與staurosporine循環(huán)比，P<0.05），同時也抑制了PGD2促進心房搏動壓上升的效應(yīng)（與staurosporine循

9、環(huán)比，P>0.05）。
　　5. MAPK/ERK的阻斷劑PD98059（30.0μmol/L）減弱了PGD2對心房ANP分泌的增加效應(yīng)（與PGD2循環(huán)比，P<0.05，與PD98059循環(huán)比，P<0.05），同時也抑制了PGD2促進心房搏動壓上升的效應(yīng)（與PD98059循環(huán)比，P>0.05）。
　　6.聯(lián)合處理PD98059和H-89，完全抑制了PGD2對心房ANP分泌的增加效應(yīng)（與PD98059+PGD2循環(huán)比，P<0.

10、01，與PD98059+H89循環(huán)比，P>0.05），同時也抑制了 PGD2促進心房搏動壓上升的效應(yīng)（與 PD98059+H89循環(huán)比，P>0.05）。
　　7. Western blotting結(jié)果表明，PGD2增加心房ERK1/2的磷酸化（與對照組相比，P<0.05）。共同處理PD98059和PGD2后，與PGD2組相比，心房ERK1/2的磷酸化降低（P<0.05）。共同處理PD98059、H-89和PGD2后，與PGD2組相

11、比，心房ERK1/2的磷酸化降低（P<0.05），與PD98059和PGD2組比沒有變化（P>0.05）。
　　8.聯(lián)合處理nifedipine和PD98059可完全抑制PGD2增加心房ANP分泌的效應(yīng)（（與 PD98059+PGD2循環(huán)比，P<0.01，與 PD98059+nifedipine循環(huán)比，P>0.05），同時也抑制PGD2增高心房搏動壓的效應(yīng)（與PD98059+nifedipine循環(huán)比，P>0.05）。
　　

12、9. PTK的抑制劑genistein（30.0μmol/L）可阻斷PGD2增加ERK1/2磷酸化的作用（與PGD2組比較，P<0.05），并減弱了PGD2對心房ANP分泌的增加效應(yīng)（與 PGD2循環(huán)相比，P<0.001，與 genistein循環(huán)比，P<0.05），同時抑制了PGD2對心房搏動壓的增加（與genistein循環(huán)比，P>0.05）。
　　10. Genistein+PD98059不僅可完全阻斷PGD2促進心房ANP