前列腺素E2誘導(dǎo)HPc2心肌細胞肥大的作用及其受體機制.pdf

1、目的：研究前列腺素E2(Prostaglandin E2，PGE2)對心肌細胞肥大的影響及其量效關(guān)系，探討前列腺素E2誘導(dǎo)心肌細胞肥大的受體機制，為尋找抑制心肌肥大的潛在靶點提供理論依據(jù)。
　　方法：實驗分為兩部分:第一部分研究不同濃度PGE2對H9c2心肌細胞的肥大影響;第二部分探討PGE2受體在PGE2誘導(dǎo)H9c2心肌細胞肥大中的作用。
　　1.第一部分采用隨機數(shù)字表法，將H9c2心肌細胞分為空白對照組（C1組）、小劑量

2、PGE2組（D1組）、中劑量PGE2組（D2組）以及大劑量PGE2組（D3組）。各組細胞培養(yǎng)液中PGE2終濃度分別為0μmol/L、0.1μmol/L、1μmol/L及10μmol/L。
　　2.第二部分采用隨機數(shù)字表法，將H9c2心肌細胞分為空白對照組（C2組）、PGE2組、EP1和EP2受體阻滯劑組（A組）、EP4受體阻滯劑組（B組）、EP1和EP2受體阻滯劑聯(lián)合EP4受體阻滯劑組(E組)。C2組不予任何處理;PGE2組在細胞

3、培養(yǎng)液中加入PGE2（終濃度1μmol/L）;A組在細胞液中加入PGE2（終濃度1μmol/L）和AH6809（EP1及EP2受體拮抗劑，終濃度10μmol/L）;B組在細胞培養(yǎng)液中加入PGE2（終濃度1μmol/L）和GW627368X（EP4受體拮抗劑，終濃度10μmol/L）;E組在細胞培養(yǎng)液中加入PGE2（終濃度1μmol/L）、AH6809和GW627368X（終濃度均為10μmol/L）。
　　3.以上各組分別給藥孵育

4、48小時后，通過Image J醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)測量心肌細胞直徑;BCA法檢測心肌細胞總蛋白含量;采用免疫熒光法觀察心肌細胞形態(tài)及體積;RT-PCR技術(shù)測量心鈉肽(atrialnatriuretic peptide，ANP)mRNA及腦鈉肽(brain natriuretic peptide，BNP)mRNA的表達水平。
　　結(jié)果：
　　1.心肌細胞直徑及總蛋白含量結(jié)果顯示:PGE2處理后的心肌細胞直徑及總蛋白含量均顯著增加;

5、同時，隨著PGE2濃度的加大，心肌細胞的直徑及總蛋白含量亦顯著增加。在第二部分的實驗中，與對照組（C2組）相比，其余各組心肌細胞的直徑及總蛋白含量均顯著增加;與PGE2組相比，EP1和EP2受體阻滯劑組（A組）無顯著差異，EP4受體阻滯劑組（B組）及EP1和EP2受體阻滯劑聯(lián)合EP4受體阻滯劑組（E組）心肌細胞的直徑及總蛋白含量則顯著降低。
　　2.心肌細胞體積結(jié)果顯示:與對照組相比，PGE2能顯著增大心肌細胞的體積，且該作用具有

6、量效關(guān)系。EP4受體阻滯劑組（B組）、EP1和EP2受體阻滯劑聯(lián)合EP4受體阻滯劑組（E組）心肌細胞體積則較PGE2組顯著減小。
　　3.RT-PCR檢測結(jié)果顯示:小劑量PGE2（0.1μmol/L）組并未增加心肌細胞內(nèi)病理性肥大標志基因ANP mRNA和BNP mRNA的表達水平，中劑量PGE2（1μmol/L）組及大劑量PGE2（10μmol/L）組心肌細胞內(nèi)ANP mRNA和BNP mRNA的表達水平則顯著提高。PGE2組、

7、A組、B組及E組心肌細胞內(nèi)ANP mRNA和BNP mRNA的表達水平均較對照組（C2組）顯著提高;但與PGE2組相比較，EP4受體阻滯劑組（B組）、EP1和EP2受體阻滯劑聯(lián)合EP4受體阻滯劑組（E組）心肌細胞內(nèi)ANP mRNA和BNP mRNA的表達水平顯著降低。
　　結(jié)論：
　　1.PGE2能誘導(dǎo)心肌細胞的直徑及總蛋白含量增加，細胞體積增大，且該作用具有量效關(guān)系，1μmol/L PGE2即可引發(fā)心肌細胞發(fā)生病理性肥大。