前列腺素E-,2-對膽管上皮癌HuCCT1和CCLP細胞增殖的影響及其機制.pdf

1、環(huán)加氧酶-2(COX-2)及其產物前列腺素E<,2>(PGE<,2>)在細胞增殖中的作用一直受到人們的關注，在許多腫瘤組織中都有COX-2/PGE<,2>的高表達現(xiàn)象，但PGE<,2>影響腫瘤細胞生長的作用機理目前還不十分清楚。PGE<,2>是COX-2的主要產物，通過刺激誘導腫瘤血管增生，抑制局部免疫功能，調節(jié)多種信號傳導途徑而影響細胞的增殖，促進腫瘤細胞的生長。因此研究PGE<,2>的細胞內信號轉導通路以及PGE<,2>影響腫瘤細胞

2、生長的機制可為防治腫瘤提供重要的依據。本實驗探討PGE<,2>對膽管上皮癌細胞HuCCT1和CCLP增殖的影響，并初步探討了PGE<,2>促進膽管上皮癌細胞生長的機制，為進一步研究PGE<,2>影響腫瘤細胞生長的機制提供一定的基礎。 研究目的：探討前列腺素E<,2>(prostaglandin E<,2>，PGE<,2>)對膽管上皮癌細胞HuCCT1和CCLP增殖的影響及其可能機制。 研究方法：1.細胞培養(yǎng)：HuCCT1

3、和CCLP膽管上皮癌細胞分別培養(yǎng)于DMEM和RPMI-1640培養(yǎng)基中。2.細胞生長和活性測定(WST-1)實驗檢測PGE<,2>對膽管上皮癌細胞增殖的影響。3.Fluo-3/AM熒光負載膽管上皮癌細胞，激光掃描共聚焦顯微鏡檢測外源PGE<,2>對細胞內鈣離子濃度的影響。4.酶聯(lián)免疫法測定膽管上皮癌細胞內環(huán)磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate，cAMP)的濃度。5.PGE<,2>、forskolin和B

4、APTA-AM處理膽管上皮癌細胞，并制作細胞爬片，進行熒光免疫細胞化學實驗，于熒光顯微鏡下觀察p-CREB的表達和定位。6.PGE<,2>、forskolin和BAPTA-AM處理膽管上皮癌細胞，提取蛋白，Western Blot檢測膽管上皮癌細胞中p-CREB蛋白的表達情況。7.收集江蘇省人民醫(yī)院膽管癌6例，免疫組化法檢測膽管癌組織中p-CREB蛋白的表達情況。 研究結果：1.細胞生長和活性測定(WST-1)實驗顯示1μmol

5、/L、5μmol/L、10μmol/L和20μmol/L PGE<,2>可促進膽管上皮癌細胞HuCCT1生長，腫瘤細胞生長率分別為105.36％、112.45％、120.73％和128.21％，CCLP細胞結果與此類似。2.10μmol/L PGE<,2>可引起HuCCT1細胞熒光值發(fā)生動態(tài)變化，熒光值平均增加約50％，表明PGE<,2>可增高HuCCT1細胞內鈣離子濃度，CCLP細胞結果與此類似。 3.PGE<,2>可增高HuCCT1

6、細胞內cAMP濃度，0.1μmol/L、1μmol/L和10μmol/L PGE<,2>作用細胞時，細胞內cAMP濃度分別為183.94pmol/L、189.01 pmol/L和202.12 pmol/L，CCLP細胞結果與此類似。4.熒光免疫細胞化學實驗結果表明：p-CREB定位于HuCCT1和CCLP腫瘤細胞核，PGE<,2>和forskolin可以使CREB蛋白磷酸化水平增高，而BAPTA.AM則抑制CREB蛋白的磷酸化。5.We

7、stem Blot實驗結果與熒光免疫細胞化學實驗結果一致，PGE<,2>和forskolin可以使CREB蛋白磷酸化水平增高，而BAPTA-AM則抑制CREB蛋白的磷酸化。6.免疫組化實驗結果表明，人膽管癌組織中有較強的p-CREB蛋白表達。 研究結論：膽管上皮癌細胞HuCCT1和CCLP經PGE<,2>處理后可見細胞內Ca<'2+>和cAMOP濃度增高、CREB蛋白的磷酸化水平增高。表明PGE<,2>可能通過Ca<'2+>、c