番石榴葉三萜類成分的含量測定與特征圖譜研究.pdf

1、番石榴葉為桃金娘科植物番石榴(Psidium guajava L.)的干燥葉,又名雞矢茶、番桃葉等;主要分布于廣西、廣東、福建和臺灣等地。番石榴葉作為民間傳統(tǒng)中草藥,具有生津止渴、收斂止瀉和消炎止血等功用,常用于治療腸炎和糖尿病。以番石榴葉總提取物為原料開發(fā)的“消渴降糖膠囊”,臨床上主要用于治療輕度及中度成年型糖尿病,療效較好,但物質(zhì)基礎(chǔ)不清楚,制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)低。本課題組前期已對番石榴葉化學(xué)成分進(jìn)行了深入研究,發(fā)現(xiàn)其中的總?cè)茷榻笛堑?/p>

2、主要活性物質(zhì)。為了進(jìn)一步對番石榴葉進(jìn)行質(zhì)量控制,本論文開展了以下相關(guān)研究工作:
　　1.對照品的制備工藝:藥材粉碎,加入95％乙醇滲漉提取,合并滲漉液,減壓濃縮,加水稀釋至含醇40%左右,過濾,濾液上樣于已處理好的D-101大孔吸附樹脂柱,用50%、80%和95%乙醇溶液洗脫,收集80%乙醇洗脫部位,減壓濃縮至干,得干浸膏。浸膏用甲醇溶解,以硅膠拌樣,過硅膠柱,用氯仿-甲醇梯度洗脫(100:0→90:10),收集100:4氯仿-甲

3、醇洗脫部位,減壓濃縮至干,得PG-1、PG-2和PG-3對照品的混合物。混合物再經(jīng)Sephadex LH-20除色素(流動相選用50%甲醇-氯仿),除色素后的對照品混合物通過制備型高效液相(HPLC)反復(fù)純化,分別收集PG-1、PG-2和PG-3的色譜峰,減壓濃縮,即得。通過上述制備工藝,分別獲得了PG-1(1.2 g)、PG-2(1.3 g)和PG-3(2 g),通過HPLC-DAD面積歸一法和HPLC-ELSD檢測其純度均大于98%

4、。
　　2.番石榴葉中PG-1、PG-2和PG-3的HPLC-ELSD含量測定方法研究:色譜柱為Cosmosil5C18-MS-II(4.6 mm×250 mm,5μm)色譜柱,流動相為乙腈-水(含0.1%甲酸)梯度洗脫,流速為1 mL/min,柱溫在30℃,ELSD檢測器漂移管溫度96℃,氣體流速2.0 L/min。測得PG-1、PG-2和PG-3的線性關(guān)系良好,r>0.9996,平均回收率在99.4%-104.4%,樣品溶液在

5、24小時內(nèi)穩(wěn)定。并應(yīng)用該方法測定了25批番石榴葉藥材中PG-1、PG-2和PG-3的含量,結(jié)果顯示,25批番石榴葉藥材中 PG-1的平均含量為0.34%,PG-2的平均含量為0.48%,PG-3的平均含量為1.18%,三者的平均含量總和為2.00%,考慮到藥材產(chǎn)地、加工、貯藏等因素及有關(guān)規(guī)定,暫定番石榴葉藥材中PG-1、PG-2和PG-3的含量總和不得少于平均含量總和的80%左右,即含量總和不得少于1.60%。
　　3.番石榴葉的

6、HPLC-ELSD特征圖譜研究:方法同番石榴葉三萜類成分含量測定部分。建立了25批番石榴葉的HPLC-ELSD指紋圖譜,確定了10個共有色譜峰,利用化學(xué)對照品對其中的7個主要色譜峰進(jìn)行了明確的指認(rèn),分別為:積雪草酸、2α-羥基齊墩果酸、2α-羥基烏蘇酸、3β-O-cis-coumaroyl-2α-hydroxyurs-12-en-28-oic acid、3β-O-trans-coumaroyl-2α-hydroxyurs-12-en-2