TGFBI及其R124位突變體的構建及在角膜營養(yǎng)不良分子發(fā)病機制方面的應用.pdf

1、山東省醫(yī)學科學院碩士學位論文TGFBI及其R124位突變體的構建及在角膜營養(yǎng)不良分子發(fā)病機制方面的應用姓名：牛靜宜申請學位級別：碩士專業(yè)：眼科學指導教師：王宜強20090420山東省醫(yī)學科學院碩十學位論文2 、用包裝細胞P T 6 7 成功包裝了病毒載體p M S C V ，并產(chǎn)生了具有侵襲能力的病毒顆粒，為下一步感染動物做好了準備。3 、p c D N A 3 ．1 - T G F B I 及其突變重組真核表達質粒轉染N I H 3

2、T 3 ，實時定量P C R 和w e s t e r nb l o t 結果顯示T G F B I 在N I H 3 T 3 細胞中基因和蛋白水平表達都明顯增強，說明載體的構建是成功的，可以J 下確表達。4 、p c D N A 3 ．1 ．T G F B I 及其突變重組真核表達質粒轉染小鼠上皮細胞T K E 2 后，檢測到T G F B I 蛋白表達無明顯增強，可能與轉染效率不高有關。進一步用包裝的p M S C V 病毒顆粒感染

3、T K E 2 ，發(fā)現(xiàn)感染效率很高，但是細胞形態(tài)改變很大，考慮改用小鼠角膜基質細胞。5 、p c D N A 3 ．1 ．T G F B I 及其突變重組真核表達質粒轉染小鼠基質細胞后，r e a lt i m eP C R 檢測到T G F B I 及突變基因表達明顯增加，并且檢測到胞外基質蛋白( e x t r a c e l l u l a r m a t r i xp r o t e i n ) e e m l 及晶體蛋白基因(

4、 c r y s t a l l i n e ) c r y a a 、c r y b a l 、c r y b b 2 表達增加，同時基質金屬蛋白酶( m a t r i x m e t a l l o p r e o t e i n a s e s m m p s ) r o m p 3 、m m p l 3 表達增加而同時其抑制劑基質金屬蛋白酶組織抑制劑( t i s s u ei n h i b i t o ro f m e t

5、 a l l o p r o t e i n a s e st i m p s ) t i m p 3及角膜基質重塑相關基因( m a t r i x ．r e m o d e l l i n g a s s o c i a t e d7 ) m x r a 7 表達減少。結論：成功構建了小鼠T G F B I 及其R 1 2 4 突變體的真核表達載體p c D N A 3 ．1 和逆轉錄病毒載體p M S C V ，將逆轉錄病毒載體用