保肝寧顆粒劑抗肝纖維化的主要藥效學(xué)研究.pdf

1、本研究中選用四氯化碳(carbon tetrachloride CCL<,4>)致大鼠肝纖維化模型，因用CCL<,4>攻擊建立的肝纖維化模型，具有簡(jiǎn)便、易行、成本低、周期短等特點(diǎn)，在形態(tài)學(xué)、病理生理學(xué)的某些方面與人肝纖維化相似。 選用酒精性肝纖維化大鼠模型，因酒精致大鼠肝纖維化模型，具有復(fù)制方法簡(jiǎn)單，穩(wěn)定可靠，造模成功率高等特點(diǎn)，適用于酒精性肝病的研究。 研究目的 探討保肝寧顆粒劑抗肝纖維化(liver fibr

2、osis LF)的藥效，并從轉(zhuǎn)化生長因子β1(transforming growth factor β1 TGFβ1)、基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因-1(tissueinhibitor of metalloproteinase-1 TIMP-1)的角度探討其抗肝纖維化的作用機(jī)理。 研究方法 一、建立四氯化碳(carbon tetrachloride CCL<,4>)復(fù)合因素致肝纖維化大鼠模型： SPF級(jí)SD大鼠56只

3、，雌雄各半，隨機(jī)分為7組，每組8只，分別為：正常對(duì)照組、肝纖維化模型組(以下簡(jiǎn)稱：模型組)、保肝寧高、中、低劑量組、秋水仙堿組、復(fù)方鱉甲軟肝組(以下簡(jiǎn)稱：復(fù)方鱉甲組)。 肝纖維化模型組及藥物組大鼠上午皮下注射40％四氯化碳花生油(第1次0.5m/100g體質(zhì)量，后每隔3日皮下0.3ml/100g體質(zhì)量)，下午藥物組予相應(yīng)藥物，模型組予生理鹽水灌胃(每日1次，每次1ml/100g體質(zhì)量)。模型及給藥組均給予高脂飲食(79.5％玉米

4、粉+20％豬油+0.5％膽固醇)，正常組予正常飲食，實(shí)驗(yàn)共進(jìn)行6周。實(shí)驗(yàn)期滿，取肝臟組織，HE及Mallory三色染色，光鏡下觀察肝組織細(xì)胞的病理改變及肝臟纖維的增生程度；取動(dòng)物血清上層，AU5400全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(glutamate-pyruvate transaminase ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(glutamicoxalacetic transaminase AST)；用放免法測(cè)定血清透明質(zhì)酸(hyaluroni

5、c acid HA)、層粘連蛋白(laminin LN)、Ⅲ型前膠原(precollagen typeⅢ PCⅢ)、Ⅳ型膠原(collagentypeⅣ CIV)；用ELISA法測(cè)定血清轉(zhuǎn)化生長因子β1(transforming growth factorβ1 TGFβ1)、基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1 TIMP-1)。 二、建立酒精(alcohol

6、 ALC)致肝纖維化大鼠模型： SPF級(jí)SD大鼠56只，雌雄各半，隨機(jī)分為7組，每組8只，分別為：正常對(duì)照組、肝纖維化模型組、保肝寧高、中、低劑量組、秋水仙堿組、復(fù)方鱉甲軟肝組。 肝纖維化模型組及藥物組，上午：予56°白酒“二鍋頭”灌胃(每日1次，每次0.5ml/100體質(zhì)量)；下午：藥物組予相應(yīng)藥物，模型組予生理鹽水灌胃(每日1次，每次1ml/100體質(zhì)量)，且每晚八點(diǎn)后禁食至第二天上午空腹灌胃后再予飼料；正常對(duì)照組予

7、等量的生理鹽水做對(duì)照。模型及藥物組予營養(yǎng)缺乏飼料(40％面粉+20％次粉+20％草粉+20％豆粉+少量豆油食鹽)，正常組予正常飼料，共90d。 實(shí)驗(yàn)期滿，取肝臟組織，HE及Mallory三色染色，光鏡下觀察肝組織細(xì)胞的病理改變及肝臟纖維的增生程度；取動(dòng)物血清上層，AU5400全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清ALT、AST；用放免法測(cè)定血清HA、LN、PCⅢ、CIV；用ELISA法測(cè)定血清TGFβ1和TIMP-1。 研究結(jié)果

8、 一、保肝寧對(duì)四氯化碳(carbon tetrachloride CCL<,4>)復(fù)合因素致大鼠肝纖維化模型的作用： 1、與正常組動(dòng)物血清相比，模型組動(dòng)物血清中的ALT、AST、HA、LN、PCⅢ、CEV、TGFβ1、TIMP-1顯著升高(P<0.05)；與模型組相比，保肝寧高、中、低劑量組血清中的ALT、AST、HA、LN、PCⅢ、CIV、TGFβ1、TIMP-1顯著降低(P<0.05)；秋水仙堿組、復(fù)方鱉甲軟肝組動(dòng)物血清中

9、上述指標(biāo)呈不同程度的下降趨勢(shì)。2、在肝組織的HE和Mallory三色染色的病理圖片中，模型組大鼠肝細(xì)胞呈彌漫的脂肪變性，肝組織內(nèi)纖維組織(fibrous tissue FT)明顯增生并形成纖維間隔分割肝小葉為假小葉結(jié)構(gòu)，且纖維間隔內(nèi)有散在炎癥細(xì)胞(inflammatory cell IC)浸潤，保肝寧組大鼠肝細(xì)胞內(nèi)可見散在的脂肪變性，肝小葉結(jié)構(gòu)不清楚，肝組織內(nèi)有少量纖維組織增生或增生不明顯。 二、保肝寧對(duì)酒精(alcohol A

10、LC)致大鼠肝纖維化模型的作用： 1、與正常組動(dòng)物血清相比，模型組動(dòng)物血清中的ALT、AST、HA、LN、PCⅢ、CIV、TGFβ1、TIMP-1顯著升高(P<0.05)；與模型組相比，保肝寧高、中、低劑量組血清中的ALT、AST、HA、LN、PCⅢ、CIV、TGFβ1、TIMP-1顯著降低(P<0.05)；秋水仙堿組、復(fù)方鱉甲軟肝組動(dòng)物血清中上述指標(biāo)呈不同程度的下降趨勢(shì)。 2、在肝組織的HE和Mallory三色染色的病

11、理圖片中，模型組大鼠的肝細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，大部分呈氣球樣變，肝組織內(nèi)纖維組織(fibrous tissue FT)明顯增生并形成纖維間隔分割肝小葉為假小葉結(jié)構(gòu)，且纖維間隔內(nèi)有散在炎癥細(xì)胞(inflammatory cell IC)浸潤，保肝寧組大鼠的肝細(xì)胞部分排列紊亂，呈氣球樣變。肝組織內(nèi)有少量纖維組織增生或增生不明顯。 研究結(jié)論 研究表明，①保肝寧對(duì)四氯化碳致大鼠肝纖維化模型具有較好的抗肝纖維化作用。保肝寧可顯著降低動(dòng)物