鱉甲活性多肽的制備工藝及其抗肝纖維化的藥效學(xué)研究.pdf

1、鱉甲為傳統(tǒng)中藥，來源于鱉科動物鱉(Trionyx sinensis Wiegmann)的背甲，具有滋陰潛陽，軟堅(jiān)散結(jié)，退熱除蒸的功效，收載于歷年版《中國藥典》，主要用于治療陰虛發(fā)熱，虛風(fēng)內(nèi)動，癥瘕等病癥。諸多文獻(xiàn)報道，鱉甲及其為君藥的復(fù)方制劑臨床用于治療肝纖維化疾患，具有良好的療效?，F(xiàn)代藥理研究表明，鱉甲提取物具有明顯抗肝纖維化作用，但其發(fā)揮藥效的物質(zhì)基礎(chǔ)不明確。本課題組前期細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示，鱉甲水提液中截止分子量6kD以下的肽類成

2、分能抑制肝星狀細(xì)胞(HSC-T6)增殖，提示其可能為鱉甲具有抗肝纖維化作用的活性部位。本論文在中醫(yī)藥理論的指導(dǎo)下，以前期的實(shí)驗(yàn)研究為依據(jù)，采用現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)，通過多學(xué)科交叉的研究方法，對鱉甲分子量小于6kD的活性多肽的制備工藝及其抗肝纖維化作用進(jìn)行了研究，并初步探討了其抗肝纖維化的作用機(jī)理，為進(jìn)一步將鱉甲開發(fā)研制成抗肝纖維化的創(chuàng)新中藥提供科學(xué)依據(jù)。
　　以多肽提取量和浸膏得率為指標(biāo)，通過正交試驗(yàn)考察料液比、提取時間、提取次數(shù)對鱉甲多

3、肽提取工藝的影響，得到了最佳提取工藝;以膜滲透通量或膜效能為指標(biāo)，運(yùn)用單因素試驗(yàn)，考察了微濾、超濾的最佳條件，采用多級膜分離技術(shù)得到了鱉甲活性多肽的最佳膜分離工藝。
　　采用CCl4誘導(dǎo)大鼠肝纖維化模型，以大鼠血清中的ALT、AST、HA、LN、PCⅢ、(Ⅳ)-C，肝臟中的SOD、MDA、HYP含量及TIMP1、TGFβ-1的表達(dá)為指標(biāo)，采用HE染色、透射電鏡觀察大鼠肝臟的顯微及超微結(jié)構(gòu)，探討了鱉甲分子量小于6kD多肽對肝纖維化的

4、治療作用及其作用機(jī)制。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，鱉甲分子量小于6kD多肽能保護(hù)肝細(xì)胞，有效抑制大鼠肝纖維化，其抗肝纖維化的作用機(jī)制可能是鱉甲小分子多肽能提高機(jī)體對HA的降解能力，抑制PCⅢ、HYP的合成及TIMP1、TGFβ-1的表達(dá)，并可能通過抑制機(jī)體脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，從而減輕肝纖維化程度。
　　飲酒導(dǎo)致酒精性肝病的發(fā)病率日漸升高，其早期病理表現(xiàn)為肝細(xì)胞氧化損傷，如不及時治療，嚴(yán)重者可引起酒精性肝纖維化。本論文探討了鱉甲水提液對急性酒精性肝損